Gibberella fujikuroiのβ-1,6-グルカン 6-グルカノヒドロラーゼ : β-1,3-およびβ-1,6-結合を待つグルカンの酵素による分解(第2報)

概要

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著者らは先に, β-1,6-グルカンヒドロラーゼ生産性の大な微生物を選択したが, そのうち, Gibberella fujikuroiはβ-1,3-グルカンヒドロラーゼ生産能が低いので, この菌を選び, そのβ-1,6-グルカンヒドロラーゼを純化し, 性質を調べた.G. fujikuroiによるβ-1,6-グルカンヒドロラーゼの生産はグルタミン酸ソーダ, コハク酸, グルセロール等を炭素源とした場合はほとんど全く認められず, Penicillium aculeatum(ルテアン)またはGyrophora esculenta(ジロフォラン, 仮称)より調製したβ-1,6-グルカンがよい誘導基質になって, 菌体増殖とは非運動的に生産される.また, ブドウ糖培地でもある程度の生産が認められcatabolite repressionの不完全な例と考えられる.β-1,6-グルカンを誘導基質として加えた培養の〓液濃縮物を透析後, DEAE-セルロース, CM-セルロース, およびバイオゲルP-100カラムクロマトグラフィーにより分画して得たβ-1,6-グルカンヒドロラーゼ標品は, 超遠心沈降法, およびDisc-電気泳動法により単一で, β-グルコシド, およびパラマイラン, その他のβ-1,6-グルコシド結合を含まないグルカンには全く作用しない.至適酸度は酢酸緩衝液(0.1M)中ではpH5であり, 安定pH6〜7である.本酵素はルテアンおよびジルフォランから高重合度ゲンチオオリゴ糖を中間的に生じ, さらに, ゲンチオトリオースおよびゲンチオビォースを生成すること, および, これらのオリゴ糖は糖転移作用により生ずるものではないが, ^<14>C-ブドウ糖をアクセプターとしたオートレジオグラムで示されることなどから, β-1,6-グルカン 6-グルカノヒドラーゼであることがわかった.本酵素のゲンチオオリゴ糖に対する作用は, β-1,6-グルカンの酸部分加水分解物を2次元展開用〓紙上に展開し, そこに純化酵素表品をスプレイし, 湿室中で反応させた後, 乾燥し, 第2次元の方向に展開して得られるオリゴ糖マップ法により研究した結果, 重合度4以上のオリゴ糖に作用し, ゲンチオトリオース, ゲンチオビォースには作用しないことがわかった.ルテアンに過剰の純化酵素を加えて長時間反応させてえた最終生成糖はバイオゲルP-2カラム(1×170cm)で分別すると, 約10%の高分子量で構造不明の残存糖と, 約90%の低分子糖がえられ, 後者は, ゲンチオトリオース, ゲンチオビォース, ブドウ糖の混合物でありその比率はブドウ糖残基の比として, 3 : 19 : 3であった.本酵素に対する基質濃度の影響を調べたところ, 見掛のK_m値は, ルテアンに対しては, その分子量を6.5×10^5とした場合1.2×10^<-7>Mとなり, ゲンシオビォースに対しては1.4×10^<-5>Mの値が得られた.
社団法人日本生物工学会の論文
1973-04-25

Gibberella fujikuroiのβ-1,6-グルカン 6-グルカノヒドロラーゼ : β-1,3-およびβ-1,6-結合を待つグルカンの酵素による分解(第2報)

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