ELISA法によるPseudomonas sepaciaの土壌からの高感度簡易検出
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概要
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土壌中からP. cepaciaを特異的かつ高感度に検出する目的で同細菌RB425株の生菌(L)およびグルタルアルデヒド固定菌(F)に対してそれぞれ作製したウサギ抗血清を用いて, 6種類のELISA法(直接法および間接法それぞれ3種)を行い, それらの精度を比較検討した。細菌細胞を0.05M炭酸緩衝液(pH 9.6)によりELISA用プレートに直接吸着させる処理(37℃, 2時間または4℃, 1晩)で, アルカリホスファターゼ標識抗体を用いた直接法, およびアビジン・ビオチン反応を利用した間接法(ABCエライザ法)のいずれの手法でも約10^4 cfu/mlまで高感度に検出できた。反応特異性ではF-抗体コンジュゲートを用いた直接法で優れ, 供試した9属38種151菌株の細菌のうちP. cepacia 22菌株のみが陽性であったのに対し, 間接法では近縁種菌との反応が認められた。前者を用いて, 本菌とErwinia carotovora subsp. carotovoraまたはP. solanacearumをそれぞれ約10^5〜10^9 cfu/g土で混合接種した3種の土壌(黒ぼく, 砂質, 黄色土)試料から本菌は10^4 cfu/g土以下まで検出可能であった。さらに, 同試料を100℃で15分熱処理することにより本菌の検出感度(410 nmにおける吸光度)および検出精度ともに増幅されることが明らかになり, 約10^2 cfu/g土濃度でも検出可能であった。
- 日本植物病理学会の論文
- 1991-04-25
著者
-
匠原 監一郎
日植防研
-
高橋 義行
日本植物防疫協 研
-
高橋 義行
(社)日本植物防疫協会研究所
-
鈴井 孝仁
農環研
-
鈴井 孝仁
生研機構
-
高橋 義行
日本植物防疫協会研究所
-
匠原 監一郎
日本植物防疫協会研究所
-
土屋 健一
農業生物資源研究所
-
本間 善久
北海道農業試験場
-
鈴井 孝仁
農業生物資源研究所
-
本間 善久
国際農研
-
土屋 健一
農業生物資源研
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