数種の乳酸菌のプロトプラスト化と再生

概要

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乳酸菌8菌株を用いて,それらのプロトプラスト形成とその再生条件を検討した.プロトプラスト化は,プロトプラスト緩衝液(HEPES: N-2-hydroxyethylpiperazine-N-2-ethanesul-fonic acid 0.02M,塩化マグネシウム1mM,ラクトース0.5M,ゼラチン0.5,pH7.0)に菌体1mg乾重量/mlを懸濁し,細胞壁溶解酵素のリゾチーム(1mg/ml)とムタノリシン(0〜100μg/ml)で処理することによって行なった.その結果,供試菌株のうちLactobacillus casei subsp. casei(1菌株),Lb. delbrueckii subsp. bulgaricus(1菌株),Lactococcus lactis subs併用で10分間処理することによって,ほとんどの菌株においてほぼ100%であった.プロトプラスト形成のみられた菌株について,再生条件を検討したところ,0.9Mラクトースで高張にしたプロトプラスト緩衝液を用い,0.5Mマルトースあるいは0.25Mマルトースと0.25Mスクロースを組み合わせたものを含む再生培地(グルコース1%,ペプトン1%,酵母エキス0.5%,L-システイン0.01%,マルトースあるいはスクロース,牛血清アルブミン0.5%,塩化マグネシウム25mM,塩化カルシウム25mM,ゼラチン2.5%,寒天1.5%,pH6.8)を使用したときに,高い再生率(1〜20%)を示した.しかしLb. delbrueckii subsp. bulgaricusでは再生した集落を確認できなかった.