遺伝子増幅法を利用した導電性中空糸膜によるウイルス検出法に及ぼす血清の影響
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概要
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血液中に存在するウイルスの核酸を利用した核酸増幅検査法(NAT ; Nucleic acid Amplification Testing)が多用されるようになり,輸血用血液の安全性が高まってきた.しかし,102PFU/mlという極微量のウイルスによる汚染の場合,ウイルスの検出は不可能であり,依然として血液製剤によるウイルス感染者が後を絶たない.そのため,B型肝炎,C型肝炎及び後天性免疫不全症候群(AIDS)といったウイルス感染を防ぐ迅速で高感度なウイルス検出法の開発が望まれている.このような背景から,導電性中空糸膜を用いたウイルス検査技術の可能性について我々は検討してきた.試料を吸引し,試料中のウイルスを膜に捕捉させる.次に,導電性中空糸膜をウイルス溶解液(1%SDSと10mM NaOHの混合溶液)に浸し,化学的にウイルス被膜(エンベロープやカプシド)を溶解し,ウイルス遺伝子を剥き出しの状態にした.続いて,膜を電極として緩衝液にウイルス遺伝子を分離せ,ウイルスの検出を行った.その結果,ウシ由来の模擬血清試料から5PFU/ml,ヒト由来の模擬血清試料から30PFU/mlとNATよりも高い検出感度であることが確認された.また検出時間も従来の約半分である1時間30分に短縮することが可能であった.これにより,さらに多くの検体を検査することが可能となる.本手法では,導電性中空糸膜を利用したウイルス捕捉,遺伝子分離,また,LAMP法による遺伝子増幅を行うことで従来のNATと同等以上のウイルス検出が可能であり,短時間の検出時間を有することから血液中の極微量なウイルスに対する高感度な検査法になり得る可能性がある.
- 2004-11-08
著者
-
三澤 顕次
北海道工業大学医療工学部医療福祉工学科
-
五十嵐 治
株式会社ニックス
-
海老川 慎
北海道工業大学工学研究科
-
海老川 慎
北海道工業大学応用電子工学専攻
-
五十嵐 治
株式会社 ニックス
-
菅原 俊雄
(株)ニックス
-
木村 主幸
(株)ニックス
-
三澤 顕次
(株)ニックス
-
有澤 準二
(株)ニックス
-
五十嵐 治
ニックス
-
三澤 顕次
北海道工業大学大学院 工学研究科 応用電子工学専攻
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