未知のウイルス二本鎖RNAゲノムの効率的なクローニング法
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概要
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未知の塩基配列を持つ二本鎖RNAを効率的にクローニングする方法を開発した。材料として, イネ黒条萎縮ウイルス(RBSDV)に感染したイネより直接抽出した10分節二本鎖RNAゲノムを用いた。二本鎖RNAゲノムの+鎖および-鎖の3'末端にポリAポリメラーゼでポリA配列を付加し, オリゴdT配列を持つアダプタープライマー(AP)を用いた逆転写反応の鋳型とした。続いて,作製したファーストストランドcDNAを鋳型として, AP中のアダプター領域と同じ配列を持つプライマーを用いてPCRを行った。その結果, RBSDV S5からS10の全長に対応する増幅産物がアガロースゲル電気泳動で確認された。プラスミドベクターにクローニングした結果, S8, S9, S10の全長cDNAクローンを作製することができた。さらに, S10の全長cDNAを含む6クローンの塩基配列解析から, 本クローニング方法は変異を起こす可能性が少ないことが明らかとなった。これらの結果から, この方法は未知の二本鎖RNAの効率的な全長クローニングに応用できると考えられた。
- 1998-08-25
著者
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