ニトロセルロースメンブランフィルター上に濃縮したタンパク質のアビジン-ビオチン複合体を用いた光音響定量

概要

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ニトロセルロースメンブランフィルター上にこん跡量のタンパク質を吸着濃縮し, N-ヒドロキシスクシンイミドビオチンでタンパク質をビオチニル化した.次いで, ベルオキシダーゼ標識アビジンにより形成させたアビジン-ビオチン複合体を4-クロロ-1-ナフトール-過酸化水素で発色させ光音響定量に供した.試料溶液中に100mMの塩化マグネシウムを添加したとき, 信号強度は極大を示した.-方, 試料溶液中にドデシル硫酸ナトリウム(SDS)を添加したとき, 信号強度はSDS濃度の増加に伴って減少した.試料タンパク質としてオボアルブミンを用いた場合, 信号強度とタンパク質量の間にはタンパク質の量が1〜300ngの範囲で直線性が認められ, 検出限界は約0.8ng(S/N=2)であった.発色なわち氷, 水道水, 日本製, カナダ製, スイス製の天然水に含まれるタンパク質を測定したところ, それぞれオボアルブミン換算で150,58,26,14ng/ml及びN.D.のタンパク質を検出した.水道水に対する添加回収率は104.3%であった.
1994-09-05