ウシα1-3 galactosyltransferaseのCOS-7細胞への導入
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概要
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αGal抗原は異種抗原として知られ,ヒトおよび旧世界サル以外の生物に広汎に存在し,異種移植における超急性拒絶反応の原因抗原と考えられている.このαGal抗原はα1-3 galactosyltransferase (α1-3GT)によって合成される.異種移植の分野では,α1-3GTを様々な方法で修飾することにより,移植可能な動物の作製が試みられている.本実験では,黒毛和牛からα1-3GTを単離し,これをαGal陰性のCOS-7細胞に導入し,我々のクローニングしたウシα1-3GTが機能するかどうかについて検討した.黒毛和牛末梢血から,RT-PCR法を用いてα1-3GTcDNAをクローニングした.これを,ネオマイシン耐性遺伝子を含むベクターに挿入し,αGal抗原発現ベクターを作製した(N3GA). N3GAをリポフェクション法により,αGal抗原陰性であるCOS-7細胞に導入した.N3GA導入翌日にIB4レクチンを用いた蛍光抗体染色を行った.N3GAを導入したCOS-7細胞(COS(+))では,αGal抗原陽性所見を認めた.また,N3GA導入2週間後に,同じくIB4レクチンを用いて行ったflow cytometryでもCOS(+)ではαGal抗原陽性所見を認めた.以上より,我々が黒毛和牛からクローニングしたα1-3GTは酵素機能を有しており,異種細胞においても機能することが示唆された.
- 東京女子医科大学の論文
- 2000-07-25
著者
-
澤田 登起彦
東京女子医科大学腎臓病総合医療センター外科
-
横山 尚彦
京都府立医科大学生体機能形態科学
-
村上 徹
東京女子医科大学第3外科
-
青柳 敬人
Ja全農etセンター
-
青柳 敬人
全農etセンター
-
青柳 敬人
北海道家畜改良事業団北見事業所試験研究室
-
青柳 敬人
Ja全農 飼料畜産中央研究所
-
青柳 敬人
全農飼料畜産中央研究所ETセンター
-
横山 尚彦
東京女子医科大学医学部解剖学・発生生物学
-
宇留野 勝好
東京女子医科大学医学部解剖学・発生生物学
-
Aoyagi Yoshito
Zen-noh Embryo Transfer Center
-
青柳 敬人
全農飼料畜産中央研究所
-
村上 徹
東京女子医科大学
-
村上 徹
東京女子医大腎センタ- 第3外科
-
Aoyagi Yoshito
Zen-noh Et Center Hokkaido 080-1407 Jpn
-
Aoyagi Yoshito
Zen-noh Et Center
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