Determination of Neutral Glycolipids in Plasma and Erythrocytes of Fabry's Disease Family by High Performance Liquid Chromatography
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概要
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Method of determination of neutral glycosylceramides in human plasma and erythrocytes by high performance liquid chromatography was studied. <BR>Neutral glycosylceramides extracted by chloroform; methanol (2;1) were separated from lipids such as glycerides and phospholipids by 50% methanol inactivated Unisil column and derivatized by 4-nitrobenzoyl chloride in pyridine at 37°C overnight. After excess reagents were removed by solvent extraction, pernitrobenzoylated neutral glycosylceramides were injected onto TSK Silica 60 column (4×250mm) and eluted with linear gradient of n-hexane; methylene chloride; acetonitrile=10; 4; 0.5 to 10; 4; 4 for 20min at a flow rate of 2.0 ml/min at room temperature. Eluent was monitored at 254 nm.<BR>N-Palmitoyl-D, L-dihydro-glucosyl- and lactosyl-cerebroside were obtained as single peaks of their pernitrobenzoylated derivatives. A good calibration curve was obtained by injecting 0.1 to 2.0 μg of the samples. Recoveries of Glc- and Lac-cermides from plasma were 89% and 78 % and those from erythrocytes were 88% and 66%, respectively. <BR>Every glycosyl ceramide in plasma and erythrocytes was separated as multiple peaks. In the family of Fabry's disease, ceramide trihexoside concentrations in plasma and erythrocytes of hemizygote were 3 to 5 times higher than those of normal and heterozygotes diagnosed by α-D-galactosidase activities in leukocytes.<BR>This method will be useful for the biochemical diagnosis of other neutral glycosylceramide and ganglioside storage diseases.
- Japan Society of Clinical Chemistryの論文
著者
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松尾 宣武
慶応義塾大学
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入 久巳
慶応義塾大学医学部中央検査室
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加野 象次郎
慶応義塾大学医学部 中央臨床検査部
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松尾 宣武
慶応義塾大学医学部小児科
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松本 宏治郎
慶応義塾大学医学部中央臨床検査部
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入 久巳
慶応義塾大学医学部中央臨床検査部
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加野 象次郎
慶応義塾大学中検
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