Non-Isotopic RNase Cleavage Assay^<TM> を用いた血友病Aの遺伝子異常の解析

概要

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血友病Aは血液凝固第VIII因子遺伝子の異常によって惹き起こされる出血性疾患である. 血友病Aの病因遺伝子異常の同定は, 第VIII因子遺伝子が非常に大きく, またそこから検出される遺伝子異常が多彩であることから容易ではない. われわれはこれを簡便かつ迅速に行うことを目的とし Non- Isotopic RNase Cleavage AssayTM (NIRCATM) を導入した. 26のエクソンとそのイントロンとの境界領域, および5’非翻訳領域を, 合計29の領域に分け, それぞれPCRにより増幅し, 増幅産物中の変異をNIRCATMでスクリーニングした. これにより翻訳領域 (7kb) の99. 5%と, 46/50のスプライスジャンクションの解析が可能であった. NIRCATMで異常がみられたPCR産物は, ダイレクトシークエンスを行い遺伝子の変異を明らかにした. 65家系69例の日本人血友病A患者を解析し, これまでに報告のない変異21種類を含む, 38種類の異なった遺伝子変異を同定した. また, その他にも2種類の新しいポリモルフィズムと, 2種類の大きな遺伝子欠失が同定された. これらのことから, 血友病Aの遺伝子診断にスクリーニングとしてNIRCATMを用いることは非常に有用であることが示された.
日本血栓止血学会の論文
2002-02-01