犬および猫における貧血関連性感染症の遺伝子診断の臨床応用に関する研究

概要

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イヌのバベシア症およびネコのマイコプラズマ症は,それぞれ貧血を発生させる感染性の疾患である。本邦では,これら疾患の病原体はバベシア症ではBabesia. gibsoni (B. gibsoni)で,マイコプラズマ症ではMycoplasma haemofelis(M. haemofelis)とされており,それぞれ赤血球に寄生し宿主に貧血を発生させる。診断は,主に末梢血血液塗抹における直接鏡検によって行われているが,極端に寄生率の低い時には確定診断を行うことがしばしば困難であり,またゴミなどの夾雑物との鑑別は難しい。我々は以前から簡便かつ高感度な検出法としてPCR法に着目し,その臨床応用に関する研究を行ってきた。M. haemofelisには,Ohio株(OH)とCalifomia株(CA)が存在することが知られており,それぞれの株の16SrRNAの塩基配列を基に個々の株を特異的に認識しうるプライマーを作製し,マイコプラズマ症疑いの症例の血液から得られたDNAを鋳型としてPCR反応を行った。その結果は,血液塗抹検査所見とすべて一致し,優れた検出系であることを報告している。本研究では,イヌのバベシア症におけるPCR法の有用性を評価するため,B. gibsoni感染が疑われた犬38症例についてEnzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)法による血中抗体価の測定と,Polymerase chain reaction (PCR)法を用いた遺伝子の検出による感染診断の比較検討を行った。その結果,ELISA法では38例中16例(42.1%)が感染陽性を示したのに対し,PCR法ではELISA陽性16例の他にELISA法により陰性であった11例を含む27例(71.1%)が陽性と判定された。PCR法で陽性の27例中4例では血液塗抹上で感染は確認できなかった。さらにPCR法では0.0003%の低い寄生赤血球率を持つ犬でも検出可能であった。以上のことからB. gibsoni自然感染症例の診断では,PCR法の方がELISA法および直接鏡検法よりも検出感度が高かった。そのためB. gibsoni感染において低寄生赤血球率の場合でもPCR法は有用な検査法であることが示唆された。また,猫のM. haemofelis感染および犬のB. gibsoni感染のPCR診断において,DNAの分離なしに全血から直接PCRを行うことを試み,従来のDNAからのPCRと同様な結果が得られるかどうか検討した。猫のM. haemofelis感染および犬B. gibsoni感染の全血にて,以前報告されているプロトコールに若干改変を行ない直接PCRを行なった。その結果,いずれの検体においてもDNAを鋳型とする従来のPCRと同じ結果が得られた。検出感度は,B. gibsoniでは0.08%寄生率,M. haemofelisのCA株感染では0.12%寄生率,OH株感染では0.26%寄生率において検出可能であった。本法は迅速性,簡便性,経済的であることからPCRの臨床応用に有用な方法であると考えられた。以上の研究の結果から,感染性の疾患の病原体を検出する方法としてPCR法が高感度な方法であることが明らかとなっただけでなく,直接PCR法が実用にむけての簡便なプロトコールの一つであることが示された。
麻布大学の論文

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