酵素サイクリング法を用いた還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドの超高感度化学発光測定法とその酵素活性測定法への応用
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概要
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還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NADH)を高感度に測定することを目的として,酵素サイクリング法によりNADHを増幅させ,化学発光法で測定する方法を検討した.酵素サイクリングに用いた酵素反応系はマレイン酸デヒドロゲナーゼ,アルコールデヒドロゲナーゼ系で,生成したマレイン酸を過剰量のNAD^+とマレイン酸デビドロゲナーゼによりNADHとする.NADHは既報の方法に従ってイソルミノール/ミクロペルオキシダーゼにより化学発光測定する方法である.最適条件下でのNADHの検量域は30fmol〜6pmol/assayで酵素サイクリングを用いない既報に比較して約300倍感度が向上しその精度は3.1〜10.5%(相対標準偏差)であった.本法をグルコース-6-リン酸デビドロゲナーゼの酵素活性測定に応用したところ,3×10^<-21>〜3×10^<-17>mol/assayの検量域で既報に比し約100倍高感度化することができた.
- 社団法人日本分析化学会の論文
- 1989-10-05
著者
-
辻 章夫
昭和大学薬学部
-
辻 章夫
昭和大学薬学部:文部省
-
前田 昌子
昭和大学薬学部薬品分析化学教室
-
前田 昌子
昭和大薬・薬品分析化学
-
前田 昌子
昭和大学薬学部分析化学
-
石沢 春生
昭和大学薬学部
-
前田 昌子
昭和大学薬学部
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