単離されたリンゴプロトプラストからのカルス形成

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木本類のプロトプラストの単離や培養は草本類に比較して一般に困燃とされるが,著名らはリンゴにおける細胞融合の基礎的知見を得るため,一カ月毎の継代で維持している葯培養起源の半数性カルスからのプロトプラストの単離とその培養を試みた。活作の高いプロトプラストを単離するには2%セルラーゼ・オノズカR-10,0.1%ペクトリアーゼY-23および0.7Mマンニトーノレを含む酵素液が適していた。また最適処理時間は2.5時間であった。ペクトリアーゼを高濃度にしたり,処理時間を長くした場合,プロトプラストの活性が低下し,その後の培養が困難であった。またプロトプラストを単離するためのカルスは新しい培地に移植後10〜15日のものが良好であった。得られたプロトプラストの培養はゼアチンの代りにベンジルアデニンを添加し,ココナットミルクを除いた改良8p培地(KAOとMICHAYLUK 1975)が適していた。培養一週間内に細胞分裂が開始し,2〜3回分裂した時点で新しい改良8p培地を加えて培養を続けると約一カ月後にはコロニーを形成した。しかしコロニー形成率はプロトプラストが密に凝集するため測定できなかった。またコロニー形成はプロトプラストの濃度が高すぎると阻害され,最適プロトプラスト濃度は1〜2×10^5個/mlであった。肉眼で観察できるまで発達したコロニーをMURASHIGEとSK00G(1962)の基本培地にカイネチン,インドール酢酸およびナフタレン酢酸を種々組合せた培地に移植することによってカルスを得ることができた。しかし現在のところ,これらのカルスからの再分化には成功していない。
日本育種学会の論文
1983-12-01

単離されたリンゴプロトプラストからのカルス形成

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