昆虫細胞を利用したカテプシンK酵素の作製
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概要
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軟骨細胞に局在するシステインプロテアーゼであるカテプシンKは,骨の差異九州に関わる酵素である。カテプシンKの阻害剤は骨粗鬆症の治療薬の候補になり得る。スクリーニングや酵素の機能を調べるためには組み換えカテプシンKを大量に作成することが必要である。我々はカイコ幼虫を用いた発現系が分泌型酵素であるカテプシンKの発現に適していると考えた。C末端にmycタグを付けたカテプシンK遺伝子をカイコ用の発現ベクターに挿入し,限界希釈法で組み換えウイルスを得た。このウイルスをカイコ培養細胞に感染させてカテプシンKの発現場所を調べたところ,細胞内で発現していた。細胞外への分泌が観察されなかったのでカイコ幼虫での発現をあきらめ,培養細胞からの精製を試みた。DEAE-セファロースカラム,Mono-Sカラム,抗myc抗体アフィニティーカラムで順次精製した結果,非活性を細胞可溶性画分の約300倍に高めることに成功した。
- 九州保健福祉大学の論文
著者
-
中込 和哉
帝京大学薬学部薬品分析学教室
-
定金 豊
九州保健福祉大学薬学部薬学科
-
今西 重雄
農業生物資源研究所昆虫生産工学研究グループ
-
伊藤 武朗
富山医科薬科大学薬学部
-
畑中 保丸
富山医科薬科大学薬学部
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中込 和哉
帝京大学薬学部
-
畑中 保丸
富山医科薬学大学和漢薬研究所
-
定金 豊
富山医科薬科大学薬学部
-
定金 豊
九州保健福祉大学 薬学部 分析学講座
-
今西 重雄
農業生物資源研究所
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