Escherichia coli K-12由来のイソアスパラギナーゼ遺伝子(pepE)のクローニングと大量発現
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概要
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L-イソアスパラギンのα-アミド基を加水分解し、アスパラギン酸を生成する反応を触媒するイソアスパラギナーゼと同一酵素と考えられるα-アスパルチルジペプチターゼ(pepE)をコードする遺伝子、pepEを大腸菌K-12株よりクローン化した。その開始コドン上流部分を改良したpepEを大腸菌JM109株で大量発現させた場合、その無細胞抽出液のPepE活性はL-アスパラギンサンP-ニトロアニリドを基質とした場合、2.92ユニット/ミリグラムとなった。この値はコントロールの2100倍である。本酵素を大腸菌形質転換体の無細胞抽出液より精製し、その酵素化学的諸性質を明らかにした。本酵素は50℃及びpH8.0において最大活性を示した。精製酵素を用いてL-イソアスパラギンとL-フェニルアラニンメチルエステルからのアスパルテームの合成を検討した。
- 2005-03-31
著者
-
浅野 泰久
富山県立大学生物工学研究センター
-
横関 健三
味の素(株)アミノサイエンス研究所
-
浅野 泰久
富山県立大学生物工学研究センターおよび工学部生物工学科
-
浅野 泰久
富山県立大学
-
米田 英伸
富山県立大学生物工学研究センター
-
水口 直之
富山県立大学生物工学研究センター
-
吉良 郁夫
富山県立大学生物工学研究センター
-
横関 健三
味の素(株)
-
米田 英伸
富山県大工・生工研セ
-
米田 英伸
富山県立大学生物工学研究センターおよび工学部生物工学科
-
米田 英伸
富山県立大学工学部生物工学研究センター
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