ビオチン-アビジン生物親和結合を用いるL-グルタミン酸に対する増幅型リアクターの設計

概要

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L-グルタミン酸に対して基質リサイクリングによる増幅機能を有した酵素リアクターを作製するために, 孔直径53.8nmのアミノプロピル化多孔性ガラスビーズ(NH_2-CPG)に段階的なビオチンーアビジン生物親和結合により, L-グルタミン酸オキシダーゼ(GlOD)とグルタミン酸脱水素酵素(GlDH)を孔内部空間に直鎖状に固定化する方法について検討した.また, それぞれの段階での酵素の固定化量から, 孔内部空間での酵素分子の配向を推定した.最も大きな増幅率は, GlODとGlDHをグルタルアルデヒド橋かけ法によりNH_2-CPGにランダム同時固定化した後, 更にアビジン分子を橋かけ分子としてGlODとGlDHをランダムに同時固定化したリアクターで得られ, キャリヤー流量が20μlmin^<-1>のときに606倍の増幅率がL-グルタミン酸に対して得られた.L-グルタミン酸に対する検量線は5×10^<-9>〜5×10^<-7>Mの濃度範囲で直線関係を示し, 検出下限(S/N=3)は3×10^<-9>M(30fmol)であった.
2001-09-05