ddY系マウス体外受精卵子の体外発生に及ぼすEDTAの影響

概要

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マウス受精卵子を体外で培養すると, その多くは2細胞期で発生を中止する。本研究では, この点を改善する目的で, ddY系マウスの体外受精卵子を用い, 体外発生に及ぼすEDTAの影響につき検討し, さらにEDTA存在下で発生した胚を用いて移植試験を行った。体外受精卵子を媒精後7時間でEDTA(0∿50μM)を含む修正Whitten培地に移し, 媒精後120時間まで培養した。EDTAを含まない培地では胚盤胞への発生はほとんど認められなかったが, 10∿500μMのEDTAを含む培地では胚盤胞への発生率が著しく改善され, 25μMの濃度で最高の成績(61%)が得られた。25μMのEDTAを含む培地への移し替えの時期およびEDTAを含む培地から含まない培地への移し替えの時期が胚盤胞への発生に及ぼす影響につき検討した結果, EDTAが有効に作用するのは媒精後12時間から33時間にかけての時期であることが知られた。また, EDTAを含む培地で媒精後96時間まで培養し, 得られた形態的に正常な後期桑実胚および初期胚盤胞38個を偽妊娠第3日の雌に移植して妊娠第17日に剖検したところ, 21個が着床し, 13個が生存胎子へと発生していた。このことから, EDTAを含む培地で発生した胚は機能的にも正常であることが推定された。
神戸大学の論文