人血中vitamin D誘導体測定に関する研究:第二編 諸種vitamin D誘導体の同一試料からの同時測定に関する基礎的研究

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概要

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• We described a specific and reliable method for the simultaneous measurement of four groups of vitamin D derivatives in 5ml of plasma using a high-pressure liquid chromatography (HPLC) and a competitive protein binding assay (CPBA). The fraction of vitamin D (v.D), 25-hydroxy vitamin D (25-OH-D), 24, 25-dihydroxy vitamin D<SUB>3</SUB> [24, 25- (OH) <SUB>2</SUB>D<SUB>3</SUB>] and 1, 25-dihydroxy vitamin D<SUB>3</SUB> [1, 25- (OH) <SUB>2</SUB>D<SUB>3</SUB>] were separated from a methanol extract of a 5 ml plasma sample by HPLC using a silicic acid column (Zorbax SIL : 0.64 × 25 cm) and repurified by a reverse phase of HPLC on Zorbax ODS. Then the v.D<SUB>2</SUB>, v.D<SUB>3</SUB>, 24-OH-D<SUB>2</SUB>, 25-0H-D<SUB>2</SUB>, 25-OH-D<SUB>3</SUB> and 24, 25- (OH) <SUB>2</SUB>O<SUB>3</SUB> were quantified by its absorbtion at 254 nm (HPLC assay). After the HPLC procedure, the 25-OH-D<SUB>3</SUB>, 24, 25- (OH) <SUB>2</SUB> D<SUB>3</SUB> and 1, 25- (OH) <SUB>2</SUB>D<SUB>3</SUB> fractions were applied to CPBA. There was a good agreement between the values measured by the HPLC assay and by CPBA for plasma 25-OH-D<SUB>3</SUB> (r=0.97) and in plasma 24, 25- (OH) <SUB>2</SUB>D<SUB>3</SUB> (r=0.98). More than 79% of the labeled vitamin D metabolites initially added to test plasma were recovered through the entire procedure. In the present assay, the detection limits of v.D<SUB>3</SUB>, 25-OH-D<SUB>3</SUB>, 24, 25- (OH) <SUB>2</SUB> D<SUB>3</SUB> and 1, 25- (OH) 2 D<SUB>3</SUB> were 1.21, 0.72, 0.12 and 0.0006 ng/ml (plasma) respectively. The variation of coefficients (CV) in the HPLC assays of v.D<SUB>3</SUB>, 25-OH-D<SUB>3</SUB> and 24, 25- (OH) <SUB>2</SUB>D<SUB>3</SUB> were 4.9, 5.0 and 26.1% for the within-assay and 9.4, 5.5 and 30.0% for the between-assay. CV in CPBA of 25-0H-D<SUB>3</SUB>, 24, 25- (OH) <SUB>2</SUB> D<SUB>3</SUB> and 1, 25- (OH) <SUB>2</SUB> D<SUB>3</SUB> were 6.5, 8.2 and 8.3% for the within-assay and 10.2, 9.8 and 10.5% for the between-assay. The results of the dilution and recovery experiments were satisfactory, indicating that the present technique measures endogenous v.D<SUB>3</SUB> derivatives correctly and accurately.<BR>In 51 normal Japanes (aged 3 to 42), the plasma concentration of v.D<SUB>2</SUB> was less than 10 ng/ml, v.D<SUB>3</SUB> was less than 31 ng/ml, 25-OH-D<SUB>2</SUB> was less than 20 ng/ml, 25-OH-D<SUB>3</SUB> was 5-61 ng/ml, 24, 25- (OH) <SUB>2</SUB> D<SUB>3</SUB> was 0.5-2.5 ng/ml and 1, 25- (OH) <SUB>2</SUB> D<SUB>3</SUB> was 6-52 pg/ml.

• 日本内分泌学会の論文

著者

• 鳥塚 莞爾

  京都大学医学部

• 山本 逸雄

  京都大学医学部放射線・核医学科

• 土光 茂治

  京都大学医学部放射線・核医学科

• 森田 陸司

  京都大学医学部放射線・核医学科

• 滋野 長平

  京都大学医学部 放射線核医学科および放射線部

• 山本 厚江

  京都大学医学部 放射線核医学科および放射線部

• 福永 仁夫

  京都大学医学部 放射線核医学科および放射線部

• 山田 和代

  京都大学医学部 放射線核医学科および放射線部

• 山本 逸雄

  京都大学医学部 放射線核医学科および放射線部

• 土光 茂治

  京都大学医学部 放射線核医学科および放射線部

• 森田 陸司

  京都大学医学部 放射線核医学科および放射線部

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