コチョウラン (Phalaenopsis) のカルス由来プロトプラストからの植物体再生
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概要
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コチョウランのカルス由来プロトプラストの単離および植物体再生にっいて検討した. 材料としたカルスは, 若い花茎の腋芽培養によって形成される微細な粒状組織を選抜移植して, 継代増殖することによって得られた. このカルスをシュークロースとココナッツウォーター (CW) を除いたP基本培地で前培養した。30日前培養後, 緑化したカルスを1.0%セルラーゼ“オノヅカ”RS, 0.1%ドリセラーゼ, 0.1%ペクトリアーゼY-23, 0.1%CaCl2・2H2O, 5.5%ソルビトールの酵素液で2時間処理し, プロトプラストを単離した. 精製したプロトプラストを2, 4-Dを0-1.0mg/l添加し, 10%ココナッツウォーター (CW) を含む, または含まないP基本培地で培養した. プロトプラストは培養後7-10日に分裂を開始し, その分裂には0.05mg/l2, 4-DとCWを添加した培地が最も効果的であった. その後新鮮培地を添加していくことによって, 0.05-0.1mg/lの2, 4-DとCWを添加した培地では, 60日後には多数のコロニーを形成した. 同培地でコロニーを連続照明下で培養するとカルスへと発達し, 緑化後, PLBを形成した. プロトプラスト由来のPLBはP基本培地 (10%CW添加) で容易にシュートを分化し, さらにハイポネックス培地に移植すると発根して植物体が再生した.
- 日本植物細胞分子生物学会の論文
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