88(P24) Lipid-mediatorを産出する触媒抗体の開発と機能改変を目的としたFab抗体の作成(ポスター発表の部)
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概要
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Phospholipase A_2 (PLA_2), rate-determining enzyme in arachidonic acid cascade, catalyzes the hydrolysis of the sn-2 ester of phospholipids in a membrane. To develop a functional molecule potentially useful for drug discovery, we have investigated the preparation of PLA_2-like catalytic antibody and also produced the corresponding Fab antibody by means of biomolecular engineering. Forty-one monoclonal antibodies specific for hapten 1 were generated using BALB/c mice. The initial screening for catalytic activity of an antibody against (±)-3 was performed by new quantative FABMS method. Nineteen antibodies were found to accelerate the hydrolysis of (±)-3 to the free fatty acid and the lysophospholipid at a significant rate above the uncatalyzed condition. MAb 13C2-1F6 with the highest rate enhancement was characterized in further detail. Michaelis-Menten kinetics for the hydrolysis of (±)-3 by mAb 13C2-1F6 afforded a k_<cat>, of 0.01 min^<-1> and a K_m of 71μM. This hydrolytic reaction was competitively inhibited (K_i=10.0μM) by the hapten methyl ester 2. The accelerating rate of 13C2-1F6 (calculated for corresponding C_1-ether derivative) was above 400-fold. Furthermore, 13C2-1F6 exhibited the same regio- and enantioselectivity, as those of phospholipase A_2. Fab antibody of mAb 13C2-1F6 was produced by arabinose-induction of E. coli in the presence of expression plasmid pARA-13C2-1F6-Fab. This protein showed the same catalytic activity as that of 13C2-1F6. The Fab fragment is very useful to develop the catalytic activity or to introduce a new function by means of molecular evolution or conjugation with Fab fragments with other specificities.
- 天然有機化合物討論会の論文
- 1999-09-01
著者
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