豚血漿中より精製した高親和性葉酸結合蛋白の葉酸化合物に対する結合特性
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概要
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豚血漿中より高親和性葉酸結合蛋白(HFBP)をアフィニティクロマトグラフィにより精製し, 豚血漿中の代表的葉酸化合物であるテトラヒドロ葉酸(THF), N^5-メチルテトラヒドロ葉酸(5MF)および酸化型葉酸(FA)との結合特性を明らかにした. 葉酸結合蛋白は精製により, 血漿の約2,000倍濃縮され, 蛋白1mgあたりの結合容量は1.4nmolとなった. 葉酸化合物(FA, THF, 5MF)のHFBPに対する解離定数はそれぞれ13, 17, 31 pMであった. さらにHFBPとトリチウム標識FAとの結合に対する, FA, THF, 5MFの阻害強度から, 豚血漿中HFBPに対する親和性はFA>THF>5MFと結論された. この蛋白結合は広範囲なpHの変動(pH6-10)に対して安定であったが, pH3以下および12以上で完全に失活した. またゲル濾過では約77 kDa附近でトリチウム標識FAとの特異的結合活性を示し, そのフラクションのSDS-PAGEによりこのHFBPの分子量は約82 kDaと推定された. 今後のさらなる精製・単離およびアミノ酸配列等の生化学的解析によってこのHFBPと葉酸化合物とのより詳細な関係が明らかにされるであろう.
- 社団法人日本獣医学会の論文
- 1999-07-25
著者
-
佐々木 一昭
(株)日立製作所中央研究所ライフサイエンス研究センタ
-
下田 実
東京農工大学農学部獣医学科獣医薬理学教室
-
夏堀 雅宏
北里大学獣医畜産学部
-
佐々木 一昭
(株)日立中央研究所メディカルシステム研究部
-
小久江 栄一
東京農工大(農)家畜薬理学
-
小久江 栄一
東京農工大学農学部獣医薬理学教室
-
岡田 真紀
東京農工大学農学部獣医学科家畜薬理学講座
-
井田 龍
東京農工大学農学部獣医学科家畜薬理学講座
-
小久江 栄一
東京農工大
-
下田 実
東京農工大学農学部家畜薬理学教室
-
下田 実
東京農工大学
-
夏堀 雅宏
北里大学獣医放射線学
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