2.ヤブレツボカビ類におけるビタミンB_<12>の取込みと生理機能 : 第397回ビタミンB研究委員会
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概要
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目的 ヤブレツボカビ(Thraustochytrids)類はドコサヘキサエン酸(DHA)を細胞内に含有することから生物餌料の栄養強化飼料として利用されている. 本研究ではヤブレツボカビ類をワムシ培養餌料として利用する上で重要な成分であるビタミンB12(B12)の取込み, 蓄積と生理機能について検討した. 方法 実験には南西諸島, 小笠原諸島の沿岸海水等より分離, 純化したThraustochytrids株の中から増殖性の良好な株を選抜して用いた. 500ml容坂口フラスコにて培養し, 得られた菌体を洗浄後, 速やかに凍結乾燥して分析試料とした. またB12取込み実験については, 増殖定常期の培養液に種々の濃度でB12を無菌的に添加し, さらに24時間培養を継続したあと, 細胞を洗浄, 回収した. B12の定量はLactobacillus delbrueckii ATCC7830によるバイオアッセイにより, 菌体脂肪酸組成についてはキャピラリーガスクロマトグラフィーで行った. B12酵素メチルマロニルCoAムターゼ(MCM)活性はHPLC法で測定した. 結果 培地にB12を添加した結果, いずれの株もB12を取込み, 蓄積し, その一部は補酵素型B12に転換されていた. B12添加によりDHA含量に大きな影響を与えなかったが, 奇数鎖脂肪酸含量が顕著に減少した. そこで, 奇数鎖脂肪酸代謝に関与するB12酵素メチルマロニルCoAムターゼ(MCM)活性を測定した. その結果, すべての菌株においてMCM活性は検出され, B12の添加によりホロ酵素活性が増加した. 特にMSR-21株では約50%がホロ酵素として存在していたので, 本菌株から各種クロマトグラフィーによりMCMを電気泳動的に均一にまで精製した. その結果, 本菌株のMCMは, 細菌では珍しく分子量80kDaの同一サブユニットから成る2量体構造を示した. 本酵素の詳細な酵素化学的性質を検討している. 〔論議〕味園委員 B12を加えない場合, いくつかの奇数鎖脂肪酸が蓄積されますが, B12を加えるとこれらの脂肪酸が減少するとのことですが, B12が欠損してプロピオニル-CoAが蓄積すると奇数鎖脂肪酸の代謝がプロピオニル-CoAで抑制されるのでしょうか. 渡辺文雄委員 ほ乳動物ではプロピオニル-CoAよりもむしろ蓄積したメチルマロニル-CoAがTCAサイクルに関与するスクシネートデヒドロゲナーゼを著しく阻害することが明らかとなっております.
- 2004-09-25
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