Agrobacterium法によるカンキツカルスからの形質転換植物の作出

概要

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材料には,`ワシントン'ネーブルオレンジ,`太田'ポンカン,`カラ'マンダリンの胚及び`トロビタ'オレンジの花粉起源胚様体から作出したカルスを用いた.それらのカルスは,カイネチン5×10_-5M,蔗糖0.2Mを含むMSの寒天培地で継代し,実験2ヵ月前から同様の組成の液体培地で2週間ごとに継代培養を行った後,実験に用いた. Agrobaclerium tumefaciensはLBA 4404起源の2系統を用いた.A415株は,binary vector systemとしてカナマイシン耐性遺伝子(P5S/nptII/Ttml)を持ったpTRA415とpAL4404を持ち,また,もうひとつの系統,GV3010株はハイクロマイシン耐性遺伝子(P35S/htp/Tnos)を持ったpGV 3850-Hygを持ったものである. 継代培養7日目に,これら2系統のA.tumefaciensとカンキツカルスを,カルス継代培地と同様の組成のMS液体培地で3〜7日間共存培養した.その後,これらのカルスをMS培地に蔗糖O.2Mを含むカルス形成培地,あるいは,MS培地にガラクトースとソルビトールそれぞれ0.1Mずつ含む胚様体形成培地(寒天0.8%)に置床した.除菌にはカルベニシリン500μg/mlを用いた.形質転換細胞の選択のために,培地にはそれぞれカナマイシン100μg/ml,あるいはハイグロマイシン20μg/mlを加えた.
日本育種学会の論文
1990-06-01