Heat Shock-derived Reactive Oxygen Species Induce Embryonic Mortality in In Vitro Early Stage Bovine Embryos
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概要
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Heat shock is known to increase the mortality of early stage embryos, but the exact mechanism is unclear. In the present study, we investigated the possibility that the increased mortality is caused by heat shock-generated reactive oxygen species (ROS). The level of ROS was controlled by using β-mercaptoethanol (β-ME), a scavenger of ROS. In vitro-produced 8-cell stage embryos were cultured at 38.5 C or heat-shocked by exposure to 41 C for 6 h with 0, 10 and 50 μM β-ME. Intracellular ROS levels were measured by a fluorescent dye, 2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCHFDA), and intracellular reduced form of glutathione (GSH) contents were estimated by another fluorescent dye, 4-chloromethyl-6,8-difluoro-7-hydroxycoumarin. Total glutathione content was estimated by the glutathione recycling assay. On day 8 after insemination, heat shock decreased the percentage of embryos that developed to the blastocyst stage and increased intracellular ROS levels, but there was no significant effect on the GSH and total glutathione contents. In contrast, β-ME significantly decreased ROS levels in heat-shocked embryos and increased the GSH and total glutathione concentrations. Ten μM β-ME significantly improved the viability of heat-shocked embryos. β-ME caused no detrimental effects when it was added at normal culture temperature (38.5 C). These results indicate that ROS is the primary cause of increased embryonic mortality in heat-shocked early stage embryos.
- 2008-12-01
著者
-
KOBAYASHI Shuji
National Livestock Breeding Center
-
高橋 昌志
(独)農業・食品産業技術総合研究機構 九州沖縄農業研究センター
-
高橋 昌志
独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 九州沖縄農業研究センター
-
高橋 昌志
(財)日本自動車研究所
-
SAKATANI Miki
National Agricultural Research Center for Kyushu Okinawa Region
-
TAKAHASHI Masashi
National Agricultural Research Center for Kyushu Okinawa Region
-
Sakatani Miki
National Agricultural Res. Center For Kyushu Okinawa Region
-
Kobayashi Shu-ichi
National Livestock Breeding Center
-
高橋 昌志
九州沖縄農業研究センター 畜産飼料作研究部 繁殖技術研究室
-
YAMANAKA Kenichi
National Agricultural Research Center for Kyushu Okinawa Region
-
Takahashi Masashi
Dep. Of Animal And Grassland Res. National Agricultural Center For Kyushu Okinawa Region
-
高橋 昌志
(独)農業・食品産業技術総合研究機構九州沖縄農業研究センター 暖地温暖化研究チーム
-
KOBAYASHI Shuji
National Agricultural Research Center for Kyushu Okinawa Region
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