Improved Assay Method of the Proteases in an Acidic Condition Using a-Naphthylester Substrates
スポンサーリンク
概要
- 論文の詳細を見る
Recenity, we, developed the new synthetic substrates for various proteases, α-naphthylester derivatives. Principle of the assay method with these substrates was based upon diazo-coupling reaction between α-naphthol released by the enzyme reaction and diazonium salt. Among the various diazonium salts, Fast Violet B salt has been used in this assay system. However, Fast Violet B salt was possible to use only in neutral pH region, and in the absence of reducing or oxidizing reagent.<BR>In this work, to establish the methods of microassay and zymogram on the proteases which have an optimum in acidic pH region, we tested the reactivities between a-naphthol and two diazonium salts, Fast Red ITR salt and Fast Blue BB salt. Consequently, only Fast Red ITR salt was found to react in acidic pH region (pH 4.0). λmax and ε values of the diazo-color with Fast Red ITR salt in acidic pH region were 475nm and 26, 000, respectively. Further, although the reaction between Fast Red ITR salt and α-naphthol was inhibited by the reducing reagent such as dithiothreitol, its inhibition was found to be removed in the coexistence of oxidizing reagent. These results indicate that, if Fast Red ITR salt is used as coloring reagent, α-naphthylester substrate is very effective for the investigation of lysosomal protease such as cathepsin B like enzymes.<BR>Zymogram on lysosomal protease of rat liver was prepared in acidic pH region using Pro-Phe-Arg-α-naphthylester as the substrate and Fast Red ITR salt. Two bands were visualized, and the appearance of these bands was promoted in the presence of dithiothreitol, and completely inhibited by the addition of leupeptin. Therefore, these bands may be due to cathepsin B like enzyme.
- Japan Society of Clinical Chemistryの論文
著者
-
吉田 滋
京都薬科大学
-
広瀬 信吾
京都薬科大学
-
藤井 節郎
大阪大学蛋白質研究所
-
吉田 滋
京都薬科大学薬品分析学1教室
-
人見 裕司
大阪大学蛋白質研究所, 蛋白質機能制御部門
-
広瀬 信吾
京都薬科大学薬品分析学1教室
関連論文
- DNA Synthesis in Tumor-bearing Rats:Purification of Liver Thymidine Kinase Stimulating Factor from Yoshida Sarcoma
- Stability of Urokinase in Solutions Containing Sodium Bisulfite
- Stability Prediction of Nafamostat Mesilate in an Intravenous Admixture Containing Sodium Bisulfite
- Degradation of Gabexate Mesilate by Sodium Bisulfite
- 亜硫酸水素ナトリウムに起因する注射液の配合変化に対するブドウ糖輸液の効果
- 混注薬におけるpH依存性外観変化の予測法 : 第2報
- 固定化酵素-ボルタンメトリーを用いたフローインジェクション法による還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドの定量
- 4-ブロモメチル-7-メトキシクマリンにより螢光標識化された5-フルオロウラシルおよびピリミジンヌクレオシド類の高速液体クロマトグラフィーへの応用
- 固定化ペルオキシダーゼ-アンペロメトリーを利用した過酸化水素検出系
- 固定化酵素を反応検出系に応用するための担体についての考察
- THE FORMATION OF 3-HYDROXY-4-METHOXYPHENYLALANINE AND 3-HYDROXY-4-METHOXYPHENETHYLAMINE IN PLASMA DURING L-DOPA THERAPY IN PATIENTS WITH PARKINSON'S DISEASE
- 過ヨウ素酸酸化を利用したN-(4-アミノブチル)-N-エチルイソルミノールによるリボヌクレオシド及びジゴキシン配糖体の化学発光高速液体クロマトグラフィー
- 高速液体クロマトグラフィーによる化学発光検出のためのピリミジン化合物のプレラベル化
- カラムスイッチング法を利用した高速液体クロマトグラフィーによる血清中のタンパク結合型胆汁酸の分別定量
- 指示薬の変色率をパラメータとするアミノピリンの滴定法
- 螢光ラベル化を利用したピリミジン核酸塩基及び5-フルオロウラシルの高速液体クロマトグラフィーによる同時定量
- Determination of Some Basic Samples in Anhydrous Acetic Acid by Complementary Tristimulus Colorimetry
- Photon Counting Determination of Ultratrace Levels of Nicotineamide Adenine Dinucleotide, Reduced Form (NADH) by Use of Immobilized Luciferase
- Continuous Fluorescence Detection of Creatine Phosphokinase Isoenzymes by the Use of a Stream-Switching Valve
- 窒素レーザー励起蛍光検出器による血清中の酵素活性測定
- 錠剤溶出試験のための内部標準を用いたコンプリメンタリートリスティミュラス法の応用に関する研究
- 新制癌剤5-Fluoro-1,3-bis(tetrahydro-2-furanyl)-2,4-pyrimidinedione(FD-1)の生体内運命(第1報)経口投与による吸収, 分布, 代謝および排泄
- 迷切後の母体の高ガストリン血症が胎仔の胃発育に及ぼす影響について
- 1.補体系蛋白の構造と機能 : a)補体の活性化(I 補体研究の進歩)
- 補体とそのインヒビタ- (タンパク質研究の新しい視点--化学的研究を中心として) -- (機能各論)
- Comparison of Proteases in Normal and Metaplastic Human Stomach Mucosa
- 弱塩基性試料の非水溶媒中での逆滴定法
- Relationship between the Color Transition and the Equivalence Point of Methylrosaniline Chloride in Non-aqueous Titration
- 指示薬を利用した光度滴定へのコンプリメンタリートリスティミュラス法の応用
- 逐次錯形成反応を用いた光度滴定へのコンプリメンタリートリスティミュラス法の応用
- 半透明溶液中の光度滴定へのコンプリメンタリートリスティミュラス法の応用
- L-LmX-LnY系へのコンプレメンタリートリスティミュラス法の応用
- LAPアイソザイムの診断的意義,組織および血清中の高分子LAPとその免疫学的研究
- コンプリメンタリートリスティミュラス法を応用したフェノール誘導体の同時定量
- 目視滴定法による有機化合物中のカルシウムおよびマグネシウムの同時微量定量
- Analysis of Bile Acids in Normal Serum Specimens by High-Performance Liquid Chromatography
- Improved Assay Method of the Proteases in an Acidic Condition Using a-Naphthylester Substrates
- Assay Method and Normal Range of Guanase in Blood
- Analysis of Bile Acids in Serum by High-Performance Liquid Chromatography Using an Automatic Pretreatment System
- Determination of Lecithin Cholesterol Acyltransferase Activity by Using Immobilized Enzyme and Voltammetry Detector
- Evaluation of CPK-BB Activity in Serum Determined by Stream Switching-System
- Fluorescent Determination of Creatine Phosphokinase Isoenzymes
- Studies on the Protease from Metaplastic Human Stomach Mucosa
- Characterization a New Chymotrypsin Inhibitor, FK-448 and Effect of the Inhibitor on Intestinal Absorption of Insulin
- New Synthetic Inhibitors of Clr, Clesterase, Thrombin, Plasmin, Kallikrein and Trypsin
- The Study on Clinical Application of the New Synthetic Substrates for Proteases
- Inhibitory Effects of a New Synthetic Complement Inhibitor FUT-175 on Various Immunological Reactions in Experimental Animals
- The Effect of Chymotrypsin Inhibitors on the Intestinal Absorption of Insulin
- Effect of Dilazep on the Automaticity of Rat Isolated Heart
- 錯形成反応を利用した光度滴定へのコンプリメンタリー トリスティミュラス法の応用
- Continuous Flow Injection Analysis of Total Bile Acid in Serum