ラットβ;-Endorphinの特異的定量 : ―HPLCによる分離とRIAとの併用―

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HPLCとRIAの併用による，ラットβ-endorphin(β-E)の特異的定量を試みた．1)合成ラクダβ-E(cβ-E)を抗原とした家兎抗血清を新たに作製し，最終希釈1万倍でRIAが可能であった．cβ-E 0.1〜2.0ngで定量性が得られ，Met-Enk，Leu-Enk，α-MSHおよびα-endorphinとの交叉反応は認められなかったが，ACTHとは2%，ヒトβ-Eとは100%の交叉反応を示した．2)μ-Bondapak Pkenylカラムを用いた逆相分配系のHPLCにより，Met-Enk，Leu-Enk，α-MSH，ACTH，cβ-Eおよびヒトβ-Eは互いに分離された．UV254nmによる検出ではcβ-E(1〜10μg)の注入量とピークの高さまたは面積との間には直線的な相関が得られ，最小検出感度は1μgであった．3)標準cβ-Eまたは下垂体(Pit)，視床下部(Hyp)，脳脊髄液(CSF)および血漿の抽出試料をHPLCに注入後，流出液を分取して凍結乾燥し，RIAによって各分取画分中のβ-E様免疫活性(β-ELIR)を測定した．標準cβ-EではUVによる検出ピークと一致した分画(cβ-E分画)に単一のβ-ELIRピークが認められ，2分間のcβ-E分画中に注入量(1〜100ng)の80%が検出された．Pit，Hyp，CSFおよび血漿のHPLCによるβ-ELIRクロマトグラムにはそれぞれ3，3，2および1個のピークが認められ，いずれの試料においてもその内の1個はcβ-E分画と一致した．PitのHPLCによる生物活性のクロマトグラムには2個のピークが認められ，cβ-E分画においてのみβ-ELIRピークと生物活性ピークが一致した．種々の生体試料中β-E含量については，いずれの試料においてもHPLCによるcβ-E分画中のβEHR(rβ-ELIR)は，RIA単独による総β-ELIRより低く，rβ-ELIRと総β-ELIRの比は臓器によって異なった．4)ゲルクロマトグラフィー存こよるcβ-E分画は，HPLCによってさらに3個のピークに分離され，その内の1個がcβ-Eと一致した．以上の結果から，HPLCによるcβ-E分画の分取と，この分画中のRIAによるβ-Eの定量との併用によって，特異的にラットβ-Eが定量されることを明らかにした．
社団法人日本薬理学会の論文

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