乾燥濾紙血からのDNA抽出法の改良およびPCRを用いた犬血中Babesia gibsoni検出法の比較検討(内科学)
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概要
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犬バベシア症を根絶するためには流行地域におけるマススクリーニングの必要があり,コストのかからない血液検体の保存と輸送方法の開発が望まれる.Whatman 3MM濾紙に吸着・乾燥させた乾燥濾紙血からのDNA抽出効率を向上させる目的で,3種類のDNA抽出法を検討・改良した結果,サポニンによる溶血処理,Chelexによるキレート処理,およびフェノール・クロロホルム・イソアミルアルコール抽出法を組み合わせた方法(Saponin-PCI法)が最も効率が高かった.健常犬血液で段階希釈した犬Babesia gibsoni(B. gibsoni)感染血液を用いてB. gibsoni 18SリボゾームRNA遺伝子を増幅する4種類のPCR法を比較検討した結果,Gib599F,Gib1270Rプライマーを用いたPCR法が最も検出効率が高かった.段階希釈したB. gibsoni感染血液を濾紙に吸着・乾燥させ,その保存性について検討した.2ヵ月間,室温で保存した乾燥濾紙血と凍結保存した全血からそれぞれB. gibsoni 18SリボソームRNA遺伝子を増幅したところ,乾燥濾紙血において,より高い検出効率が認められた.乾燥濾紙血,Saponin-PCI法,およびGib599F,Gib1270Rを用いたPCR法の組み合わせは,安価で,安定性が高く,高感度な犬B. gibsoni感染症の検査として有望な方法であることが示唆された.
- 2008-05-25
著者
-
阿部 仁一郎
大阪市立環境科学研究所微生物保健課
-
谷 浩行
大阪府立大学生命環境科学研究科高度医療学講座獣医内科学教室
-
多田 裕治
大阪府立大学生命環境科学研究科高度医療学講座獣医内科学教室
-
笹井 和美
大阪府立大学生命環境科学研究科高度医療学講座獣医内科学教室
-
馬場 栄一郎
大阪府立大学生命環境科学研究科高度医療学講座獣医内科学教室
-
笹井 和美
大阪府立大学大学院生命環境科学研究科
-
笹井 和美
大阪府立大学大学院農学生命科学研究科獣医学専攻獣医内科学研究室
-
阿部 仁一郎
大阪市立環境科学研究所
-
馬場 栄一郎
大阪府立大学大学院農学生命科学研究科
-
谷 浩行
大阪府立大学大学院生命環境科学研究科
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