RNA抽出過程を省略したワンステップRT-PCR法のレーザーマイクロダイセクション試料への応用(短報)(病理学)
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概要
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レーザーマイクロダイセクション(LMD)により得られた微小サンプルに対する,RNA抽出過程を省略したRT-PCR法の応用を試みた.ラットの肝臓および腎臓より未固定凍結切片を作成し,LMDにより切り出したサンプルをDNase処理後,直接RT-PCRのテンプレートとした.検出感度に関しては,最小の場合肝細胞25個からglyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)cDNAsが増幅された.反応の特異性を確認するために,肝細胞,腎尿細管上皮細胞,腎糸球体細胞よりアルブミンcDNAの増幅を試みた結果,肝細胞サンプルにのみバンドが検出された.LMDによる試料の切り出し後,あらかじめ通常のサーマルサイクラーを用いた逆転写反応,10サイクルのPCRを行い,反応液のみをリアルタイムPCR装置に移すことにより,容易に定量pcRを行うことが可能であった.テンプレート量とPCRシグナル強度の相関性も良好であった.以上の結果より,本実験プロトコールはLMDにより得られた微小サンプルの遺伝子発現解析に有用であると考えられる.
- 社団法人日本獣医学会の論文
- 2003-08-25
著者
-
岡田 宗典
全農家畜衛生研究所
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岡田 味世子
三菱ウェルファーマ(株)安全性研究所
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坂入 鉄也
三菱ウェルファーマ(株)安全性研究所
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高木 司郎
三菱ウェルファーマ(株)安全性研究所
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小林 潔
三菱ウェルファーマ(株)基盤研究所
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内海 博之
三菱ウェルファーマ(株)安全性研究所
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池田 五子
三菱ウェルファーマ(株)安全性研究所
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日下部 愛泉
三菱ウェルファーマ(株)安全性研究所
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小林 潔
三菱ウェルファーマ(株)基盤研究所:三菱ウェルファーマ(株)安全性研究所
-
玉原 智史
東京大学大学院農学生命科学研究科
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