15. 光顕下垂体酵素抗体法の改良法 : Epon包埋切片の応用
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概要
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〔目的〕Epon包埋したラット下垂体に、酵素抗体法を施行することにより、光顕的ホルモン局在の詳細の観察、単一操作による電顕酵素抗体法への可能性を検討した。〔材料及び方法〕ラット正常下垂体を4%paraform-aldehyde, PLP, Zamboni, Acrolein (Merck)により固定し、オスミウムにより後固定の後、40℃で約3日間Eponを重合し、包埋した。ガラスナイフにより1μの切片をスライドグラスにのせ脱樹脂、H_2O_2の処理を加えた。酵素抗体法は、抗ACTH, GH, Prolactin, LH抗体により、Nakaneの関接法を施行し、発色反応には、DABを使用した。〔結果及び考按〕本法により染色を行った結果、ACTH, GH, PRL, LHともに、光顕的に、通常パラフィン切片よりはるかにシャープな局在観察が得られたが、中でもAcrolein (Merck)が優れていた。これにより、オスミウム後固定や、Epon包埋がペブチドホルモン及び、糖蛋白ホルモンの抗原性を阻害しないことが判明した。反応後、Eponに再包埋し、超薄切片を電顕で観察した所、DABの反応産物は、顆粒にほぼ一致して認められた。本法は、比較的大きな切片を観察出来、単一操作で、電顕観察に移行する可能性を更に追及中である。〔本研究の一部は文部省がん特別研究によった〕
- 日本組織細胞化学会の論文
- 1977-10-20
著者
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