スギ花粉の主要アレルゲン Cry j 2に対するモノクローナル抗体の作製 : N末端ペプチド認識抗体との反応性を指標として精製した Cry j 2を用いて

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Cry j 2の N 末端10残基のペプチドを化学合成し, hapten-carrierの形でウサギに免疫し抗体 (N-10抗体)を得た. この抗体は, クロスブロットにより, hapten部分を認識していることが示された. そこで, この抗体に対する反応性を指標に Cry j 2の精製を試みた. N-10抗体反応物は, 50mM Tris-HCl buffer (pH7.8)の条件下, DEAE-Sephadexの非吸着分画に存在した. そこで非吸着分画を集め,10m M acetate buffer (pH5.0)の条件下, CM-Sephadex処理を行った. 以前の報告とは異なり, CM-Sephadex吸着分画には N-10抗体反応物は存在せず, 非吸着分画に存在した. 非吸着分画を80%飽和硫安で濃縮し, これを Superdex pg 200ゲルクロマトグラフィーにかけた. 主要ピークを final preparationとし, SDS-PAGEを実施した. 還元条件下では40kDaの, 非還元条件下では37kDaの明瞭なバンドが認められた. さらにスギ花粉症患者血清中のIgEとの反応性を検討したところ, 強いアレルゲン活性が認められた. 以上の成績は, Cry j 2の報告と一致した.このことから, final preparationは Cry j 2である可能性が示唆された. final preparationをマウスに免疫し, モノクローナル抗体を作製した. final preparationと反応する11クローンが得られた. 本クローンが産生する抗体は, Cry j 1とは反応しなかった. 抗体の特異性を確認する目的でウエスタンプロットを実施した. その結果, 本抗体およびN-10抗体はいずれも同じ蛋白を認識し, その分子量は40kDaであった. 以上のことから, Cry j 2に対するマウスモノクローナル抗体が得られた可能性が強く示唆された. また, アミノ酸配列が明らかになっている主要アレルゲンの精製には, N-末端ペプチド認識抗体を用いる方法が大変有用であることが示された.
1995-04-30

スギ花粉の主要アレルゲン Cry j 2に対するモノクローナル抗体の作製 : N末端ペプチド認識抗体との反応性を指標として精製した Cry j 2を用いて

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