イネの葉緑素タンパク質複合体の簡易分析法

概要

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葉縁素タンパク質複合体の分析のために,ショ糖濃度勾配遠心法による葉緑体分画法に変えて,2段階(Triton X-100→SDS)電気泳動法による簡易分析法を考案し,より簡便な方法でチラコイド膜を構成するタンパク質の分析を行った.植物体より採取した試料を石英砂とともに氷冷した乳鉢ですつつぶし,62.5mMトリス-塩酸緩衝液(pH6.8)を加え,冷却遠心機により可溶性タンパク質を取り除いた.遠江管の底に残った表面が緑色の残査は不溶性のタンパク質を含んでいると考えられた.また,この緑色の残査は葉緑体中のチラコイド膜に由来するものと思われた.そこで,4%Triton X-100(Polyoxyethyleneglycol p-t-octylphenyl ether)および18% glycerolを含むトリス-塩酸緩衝液でこの残査を処理したところ,この緩衝液は葉緑素タンパク質複合体を含む,水不溶性のチラコイド膜を効果的に可溶化した.この葉緑素タンパク質複合体を含む溶液を3%Triton X-100を含むポリアクリルアミトゲル電気泳動によって分離すると,葉緑素タンパク質複合体は葉緑素とタンパク質の結合は破壊されず,数本のバンドが密に重なり合いあたかも1本のグリーンバンドのように分離された.このバンドのポリペプチドパターンは,ゲルから水平にこのバンドを切り出し,50mMβ-mercaptoethanolおよび5%SDS(sodium dodecyl sulfate)を含むトリス-塩酸緩衝液に浸し70℃で30分間処理し,LAEMMLD(1970)の方法に従いSDS電気泳動法によつ分離した.このような方法を用いてペチュニア,キク,栽培稲60品種および野生稲11種の葉緑素タンパク質複合体のバンドパターンを比較したところ,ペチュニア,キク,イネでは3種それぞれに異なった泳動パターンを示した.イネにおいては,O.alta(CCDDgenome),O.latifolia(CCDD)およびO.brachyantha(FF)を除いて,非常によく似たバターンを示した.また,これらの異なった泳動パターンを示した3種においても,他のものとの比較で,1-2本のバンドに違いがみられたのであった.さらに,今回用いた方法と従来行われている方法との比較を行い,ポリペプチドパターンには両者の間で差はみられなかった.
日本育種学会の論文
1990-09-01

イネの葉緑素タンパク質複合体の簡易分析法

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