Automated Determination of Prekallikrein in Plasma Using a New Synthetic Substrate
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概要
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An amidolytic assay using a new substrate, H-D-Pro-Phe-Arg-ρ-acetylanilide (KL-12), was designed to measure prekallikrein in plasma, Prekallikrein was converted to kallikrein with <I>Pseudomonas aeruginosa</I> elastase, and the amidolytic response of kallikrein to KL-12 was subsequently measured.<BR>The kinetic parameters of plasma kallikrein as a function of KL-12 or of the ordinary substrate, H-D-Pro-Phe-Arg-ρ-nitroanilide (S-2302), were Km=2.8×10<SUP>-4</SUP>M and k<SUB>cat</SUB>=208s<SUP>-1</SUP>, or Km=2.5×10<SUP>-4</SUP>M and k<SUB>cat</SUB>=176s<SUP>-1</SUP>, respectively, A comparative study of the automated methods employing plasma samples showed good correlation between the assays using KL-12 and S-2302 (r=0.997, n=30, y=0.95x+4.5). The coefficients of variation for multiple measurements with pseudomonal elastase and KL-12 of a plasma sample with low level prekallikrein (106nM, 30% of the normal pooled plasma) within a run (n=10) and between runs (n=10) were CV=2.51% and CV=4.24%, respectively. Prekallikrein concentrations in plasma samples from 80 healthy individuals (M=40, F=40) were measured with the automated method and the normal range obtained by the parametric method was 270-426nM (77-121% of the normal pooled plasma). We have reported that the determination of plasma prekallikrein can be easily automated by the activation of prekallikrein with <I>Pseudomonas aeruginosa</I> elastase and by using a new chromogenic substrate of kallikrein.
- Japan Society of Clinical Chemistryの論文
著者
-
岡部 紘明
熊本大学医学部
-
山本 哲郎
熊本大学大学院医学研究科分子病理学教室
-
片山 勝博
日東紡績株式会社バイオケミカル研究所
-
岡元 和文
熊本大学医学部付属病院救急部・集中治療部
-
黒岩 勝昌
日東紡績株式会社開発研究所
-
澁谷 陽子
熊本大学医学部臨床検査医学・附属病院中央検査部
-
遠藤 光二
日東紡績株式会社バイオケミカル研究所
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千場 梅子
熊本大学医学部臨床検査医学・附属病院中央検査部
-
西尾 泰子
熊本大学医学部臨床検査医学・附属病院中央検査部
-
黒岩 勝昌
日東紡績株式会社バイオケミカル研究所
-
岡部 紘明
熊本大学医学部臨床検査医学・附属病院中央検査部
-
岡元 和文
熊本大学医学部附属病院集中治療部
-
山本 哲郎
熊本大学大学院医学研究科 脳・免疫統合科学系専攻分子病理学
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