指標 (GUS) 遺伝子を有する<I>Agrobacterium temefaciens</I>と<I>A. rhizogenes</I>利用によるハナタバコおよびハボタンの形質転換
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概要
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ハナタバコ (<I>Nicotiana</I> × <I>Sanderae Hort</I>) とハボタン (<I>Brassica oleracea var. acephala</I> DC) の形質転換が,<I>Agrobacterium tumefaciens</I>と<I>A. rhizogenes</I>ベクターシステムを用いて試験された. プラスミドpBI 121 (β-Glucuronidase (GUS) 遺伝子とカナマイシン抵抗性遺伝子を含む) がtri-parental matingまたは凍結-融解法を用いて<I>Agrobacterium</I>に導入された.<BR>pBI 121を有する<I>A. tumefaciens</I>がハナタバコのリーフディスクに接種された後, 植物ホルモン, カナマイシン硫酸塩およびカルベニシリンナトリウムを含むMurashige-Skoog (MS) 培地で培養された. その結果リーフディスクの周辺から6個のカルスが生じ, それらより茎葉が10本分化した. このうち9本が5-bromo-4-chbro-3-indolyl glucuronide (X-gluc) 試薬に反応し, 植物細胞にGUS遺伝子が導入されたことが示唆された. これらの茎葉は, カナマイシン硫酸塩を含むMS培地で生き続けたが, 菌を接種していないリーフディスクから再生した茎葉は枯死した. これらの結果から9個の茎葉は, pBI 121が導入された形質転換体と考えられた.<BR>pBI 121を有する<I>A. rhizogenes</I>がハボタンの葉柄に接種された. その結果10本の根が生じたが, 2本の根だけがX-glucに反応した. この2本の根は, 植物ホルモンとカルベニシリンナトリウムを含むMS培地で培養したところ5本の茎葉が生じた. すべての茎葉は再びX-glucにおよび他の試薬, 4-methyl umbel-hferyl glucuronide (MUG) に反応した. これらの茎葉はカナマイシン硫酸塩を含むMS培地で生き続けた.これらの結果から5本の茎葉は形質転換体と判断された.
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