キリ (Paulownia fortunei) の葉肉プロトプラストからの植物体再生
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概要
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キリの若葉からプロトプラストを単離し, その培養条件および再分化条件について検討した. 播種後1.5〜2ヵ月目の展開若葉を酵素液 (2%セルラーゼオノズカRS, 0.3%マセロザイムR10, 0.1%ペクトリアーゼY-23) で8時間静置処理してプロトプラストを単離した. 得られたプロトプラストをK8P改変培地を用い, 25℃弱光下で培養した. プロトプラストからの再生細胞分裂およびコロニー形成に対するプロトプラストの適正密度は1ml当り5×105個で, ホルモンとしては2,4-D 0.2mg/lあるいはNAA 1mg/lとBA 0.5mg/lの組合せがもっとも効果的であり, 分裂率は28.6%であった. ビタミンC 5mg/l, PVP 5mg/lを添加することによりコロニー細胞の褐変を抑制し, 増殖を促進した. 3週間後のコロニー形成率は培養したプロトプラストの約12%であった. 約1mmに生育したコロニーをMSB増殖培地に移植し, 2週間後には直径3〜4mmのカルスを得た. これらのカルスをMSB再分化培地に移植し, 20日後には不定芽が得られた. 再分化培地のホルモン構成はIAA 0.5mg/l, BA 1mg/l, Zeatin 1mg/lが最適で, その場合の再分化率は41.7%であった. 再分化した不定芽を, 2分1希釈MS培地にIBA 0.5mg/l, GA3 0.1mg/lを添加した発根培地に移植することにより, 完全な植物体を得ることができた.
- 日本植物細胞分子生物学会の論文
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