カイコアミノペプチダーゼNの培養昆虫細胞膜への発現提示と殺虫性毒素Cry トキシン受容体機能の解析

概要

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カイコガ(Bombyx mori)幼虫の中腸上皮細胞アピカル膜上のブラシ状膜(Brush Border Membrane;BBM)に存在するタンパク質のアミノペプチダーゼN1(BmAPN1)は、鱗翅目昆虫を特異的に殺す毒素Cry1Aa の受容体と考えられているが、その確証は未だ示されていない。BmAPN1が毒性発揮へ関与するかを確認するために、BmAPN1を培養昆虫細胞膜に発現させCry1Aa との相互作用を調査した。昆虫培養細胞株のHigh Five 細胞を用いたバキュロウイルス発現系を構築した。組換ウイルスの感染により、感染処理から48時間後には110 kDa のBmAPN1が発現し細胞膜上に提示された。アミノペプチダーゼ活性は非感染細胞の10倍あり、BmAPN1の活性が保持されていることが示された。High Five 細胞に発現したBmAPN1の分子サイズは、BBM 上に存在するBmAPN1と同程度で、細胞膜上に存在した。組換BmAPN1が活性を持ちしかも細胞膜上に提示されたことで、この発現システムは、アミノペプチダーゼとCry1Aa との相互作用を解析する上で非常に役立つと期待された。
新潟大学の論文