形質転換および突然変異法によって作出されたα-アミラーゼ高生産株Bacillus subtilis 2633のα-アミラーゼの精製・結晶化
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概要
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DNAによる形質転換法を利用して作出されたα-アミラーゼ高生産株B. subtilis 2633のα-アミラーゼの精製を試み以下のごとき結果を得た. (1) 本菌は,培養72時間目で約50,000u/mlの高生産を示した.そのα-アミラーゼは,細胞外に生産される総蛋白質の約80%を占めた. (2) 培養上清よリアセトン沈殿,脱塩, DEA-スフェロシルカラムクロマトグラフィー,濃縮の操作で容易に結晶が得られた.再結晶化により,純度99.7%の結晶が51%の収率で得られた. (3) 本酵素の最適反応pHは6.0であった.またpH 5.0ないし7.0の範囲で安定であり,熱に対しては40°C以下で安定であったが70°C, 10分処理では完全に失活した. (4) SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動法で測定した分子量は47,000,可溶性デンプンに対するKm値は0.78mg/ml,またmolecular activityは約2.5×104/minであった.
- 社団法人 日本農芸化学会の論文
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