アミノ酸類のHPLC分析用蛍光誘導体化試薬4-(5,6-ジメトキシ-2-フタルイミジニル)-2-メトキシフェニルスルホニルクロリド及び尿中遊離型ヒドロキシプロリンの定量への応用
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概要
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アミノ酸類の定量のための高感度なHPLC用蛍光誘導体化試薬として4-(5,6-ジメトキシ-2-フタルイミジニル)-2-メトキシフェニルスルホニルクロリド(DMS-CDを開発した。DMS-Clは、塩基性下、アミノ酸類と反応して発蛍光性のスルホンアミド誘導体(Ex318nm,Em406nm;アセトニトリル-水混液中)を生成した。モデル化合物としてヒドロキシプロリン(Hyp)及びアラニン(Ala)を用いてDMS-Clによる誘導体化反応条件について検討した。誘導体化反応は、Hypでは室温、5分で完了し、Alaでは70℃、15分で完了した。Hypの誘導体化率は約100%であった。ほとんどすべてのアミノ酸の検出限界(S/N=3)は5fmol/注入量以下であった。DMS-Clを用いて尿中遊離型ヒドロキシプロリンの濃度をHPLCにより測定したところ、その濃度(mean±SD,n=10)は3.8±2.76μM(2.7±1.71nmol/mg creatinine)であった。
- 福山大学の論文
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