ジャガイモXウイルス接種タバコプロトプラストから分離した粗膜画分におけるウイルスRNAのinvitro合成

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ジャガイモXウイルス接種タバコ培養細胞プロトプラストの磨砕液より, 内在する鋳型RNAをもとにin vitroにおいてウイルスゲノムRNA(6.4kb)と二種類のサブゲノムRNA(2.1kbと0.9kb)を合成する粗膜画分を得た。これらのRNA合成産物はRNaseに対する感受性からゲノム長RNAの多くは複製中間体であり, サブゲノム長RNAは一本鎖であることが分かった。また, リボヌクレアーゼプ口テクション実験により, これらの合成RNAはほとんどが(+)鎖RNAであった。さらに, 本膜画分を micrococcal nuclease で処理すると, 内在性鋳型RNAは消化され, RNA合成産物はみられなくなったが, PVXRNAを鋳型として添加するとゲノム長RNAの合成のみが認められ, 二種類のサブゲノム長RNAの合成はみられなかった。また, 本膜画分をプロテナーゼ(V8プロテナーゼおよびトリプシン)で処理するとゲノム長RNAの合成は影響を受けなかったが, 二種類のサブゲノム長RNAの合成活性は消失した。さらに, 界面活性剤(Brij58)を用いて可溶化を行ったところ, サブゲノム長RNAの合成活性は本膜画分から可溶化されたが, ゲノム長RNAの合成活性は可溶化されなかった。以上の結果から, PVXのゲノムRNAとサブゲノムRNAは膜の異なる部位において合成され, 前者は膜の内部に局在するのに対し, 後者は膜の表面近くに存在すると推測された。
1998-04-25

ジャガイモXウイルス接種タバコプロトプラストから分離した粗膜画分におけるウイルスRNAのinvitro合成

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