凍結融解後のラット卵子の体外受精
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概要
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雌性生殖細胞の有効利用を目的として,ラット未受精卵について凍結融解後の形態と体外受精の可能性を検討した.21〜23日齢のWistar系雌ラットから得た過排卵卵子を0.1%のhyaluronidaseを含む修正KRB液で処理して,顆粒膜細胞を除去した.0.1mlの修正PBS液を含む試験管(10×100mm)に20〜30個の裸化卵子を移した後,試験管を室温から氷水中に移した.5分後に3M-DMSOを含む0.1mlのPBSを5分間隔で3回に分けて添加し,-5°Cのドライ•アイスーアルコールに試験管を移して植氷を行った.-5°Cから-80°Cまで0.33°C/分の割合で冷却後,液体窒素に試験管を投入して一定期間保存した.融解は室温空気中で行い,PBSを添加してDMSO濃度を希釈後,卵子の形態を調べ,正常と思われる卵子を5〜6時間前培養した精巣上体精子液(0.32〜0.45×106精子/ml)に移して授精した.6〜91日間凍結保存した卵子を融解した結果,240個のうち58個(24%)の卵子が形態的に正常であった.授精試験の結果,授精後5時間で42/個(72%)の卵子に精子侵入が認められたが,このうち正常な受精途上にある卵子は28個(67%)で,14個(33%)は異常卵子であった.一方,180日間凍結保存された100個の卵子のうち,形態的に正常であった14個の卵子を授精後26時間培養した結果,13個(93%)の卵子に精子侵入が認められたが,そのうち4個は正常な分割卵であり,8個は異常受精卵であった.
- 社団法人 日本畜産学会の論文
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