Pregnancy-Associated Plasma Protein A (PAPP-A)の分離抽出
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概要
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我々は, ゲル濾過クロマトグラフィー・Heparin-Sepharoseアフィニティークロマトグラフィー・DEAE-Sephacelクロマトグラフィーを用い, 新たに開発した3段階クロマトグラフィー法によって, Pregnancy-Associated Plasma Protein-A (PAPP-A)を分離抽出した. 最初に正常妊娠末期母体血清30ml中の血清蛋白質をゲル濾過クロマトグラフィーによって分子量に従い分離した. ラジオイムノアッセイ(RIA)法により, PAPP-Aは高分子領域分画中に検出され, 母体血清中総PAPP-A量の91%がゲル濾過クロマトグラフィーにより溶出回収された. 次にこのPAPP-A含有分画をHeparin-Sepharose アフィニティークロマトグラフィーを用い, それぞれNaCl 0.15M, 0.30M及び0.60M含有の0.05Mトリス緩衝液にて順次分離溶出した. NaCl 0.60M緩衝液によりカラムに添加した総PAPP-A量の93%が回収された. さらにこのPAPP-A含有分画をDEAE-Sephacelクロマトグラフィーを用い, それぞれ0.15M, 0.30M及び0.45M NaCl含有酢酸緩衝液(pH 5.5)により順次分離溶出した. 0.30M緩衝液によりカラムに添加した総PAPP-A量の91%が回収された. 最後にPAPP-A含有分画を脱塩した後10倍に濃縮し, 3.8 IU (1.7mg)のPAPP-Aを得た. 本法により母体血清中総蛋白量の99%が除去され, 総PAPP-A量の74%が回収された. 分離抽出操作の前後で総蛋白量に対する総PAPP-A量の比(mIU : PAPP-A/mg : Protein)は526倍となり, 純度(mg : PAPP-A/mg : Protein)は68.4%となった. 精製された蛋白質はSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動法(SDS-PAGE)にて, 200kDa上の単一なバンドとして観察され, またWestern blotting法により, 分離抽出された主な蛋白質がPAPP-Aであることが示された. また交叉免疫電気泳動法及びTandem交叉免疫電気泳動法により, 今回我々が分離抽出したPAPP-Aは以前より使用されてきたTeisner et al.によるPAPP-Aと免疫学的に相同であることが示された. 今回新たな方法を用いて分離抽出されたPAPP-Aは純度が高いため, 今後より鋭敏で簡便な測定系の開発と, 標準品として広く利用されることが期待できると同時に, PAPP-Aの生体内での生物学的役割を明らかにするための, 基礎的研究に利用されると考えられる.
- 社団法人日本産科婦人科学会の論文
- 1996-01-01
著者
-
井坂 恵一
東京医大
-
井坂 恵一
東京医科大学病院産科婦人科学教室
-
鈴木 良知
東京医科大学産科婦人科学教室
-
高山 雅臣
東京医科大学産科婦人科学教室
-
高田 淳子
東京医科大学産科婦人科学教室
-
井坂 恵一
東京医科大学
-
鈴木 良知
東京医科大学 産婦人科学 教室
-
グルジンスカス J.G.
ロンドン大学ロンドン・ホスピタル・メディカル・カレッジ産婦人科学教室
-
高山 雅臣
東京医科大学
-
高田 淳子
東京医科大学産婦人科学教室
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