40. アクティベーションタギング法を用いたタバコ再分化異常株の作製と解析
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概要
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Organ regeneration as well as cell proliferation in plant are mainly controlled by auxin and cytokinin. We established about 1,000 activation tagging lines of tobacco, and isolated three mutants (regeneration-less 1-3 ; rel1-3) which showed abnormal regeneration on hormone-free medium. rel1-3 did not regenerate root and rel1 could not grow, whereas they grew vigorously on the shoot-inducing medium which contained (10)^<-7>M NAA and (10)^<-5>M BA. More detailed analysis of the growth on the media with different concentration of NAA and BA showed that rel1 growth was dependent on the cytokinin. rel2 also showed no root formation in any combination of NAA and BA. To get more information about the molecular mechanism of mutants, we examined the gene expression profiles in shoot culture using hormone-responsive genes as "molecular maker". rel1 showed increased expression of ethylene responsive gene (OLP). Whereas rel2 showed enhanced expression of OLP, and decreased expression of gibberellin responsive gene (Ntc12), and D-type cyclin (Nicota ; CycD3 ; 2). rel3 showed increased expression of auxin responsive gene (Nt-iaa4.3), and ethylene responsive genes (OLP and ERF3), and also showed decreased expression of cytokinin responsive gene (cig2), jasmonic acid responsive gene (JIGT), and D-type cyclin. To isolate the target gene in mutants, we determined the numbers of inserted T-DNA by Southern blot analysis. rel1,rel2,and rel3 had 2,2,1 T-DNA insertion. Flanking region of T-DNA was isolated by TAIL-PCR method, and one of T-DNA in rel1 was found to be inserted adjacent of receptor-like kinase gene, Ntrek1. RT-PCR analysis indicated the increased expression of Ntrek1 in rel1. The physiolosical role of Ntrek1 is now examined using overexpression of Ntrek1 in transgenic tobacco.
- 植物化学調節学会の論文
- 2003-10-10
著者
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