3'-MeDAB投与マウス肝におけるmOGG1発現の検討
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概要
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3'-Methyl-4-dimethylaminoazobenzene(3'-MeDAB)は強力な肝発癌物質であり、マウス肝臓DNA中に8-ヒドロキシグアニン(8-OH-Gua)の生成を高めることが知られている。我々は3'-MeDABの発癌機構と8-OH-Gua生成との関連を検討する目的で、3'-MeDAB投与による8-ヒドロキシグアニン修復酵素(mouse 8-oxoguanine DNA glycosylase;mOGG1)のマウス肝臓での発現を調べた。実験は3週齢雄性ddYマウスに3'-MeDABを0.06%含んだ飼料を8ヶ月間投与した後に屠殺し、肝臓を取り出し、蛋白検出(SDS-PAGE、ウェスタンブロット)および免疫組織染色を行なった。その結果、ウェスタンブロットによりコントロールマウスではほとんど検出されない32kDaのmOGG1蛋白が3'-MeDAB投与マウスで強く検出された。この蛋白はmOGG1蛋白の分子量38kDaより小さいため、修復酵素として機能していない可能性があり、これが発癌機構と何らかの関連があるとも考えられた。mOGG1の主要な機能は8-OH-Guaをグリコシド結合で切断するグリコシラーゼ活性とその後に生じるAP領域を切断するAPリアーゼ活性にある。そこで、この32kDa mOGG1蛋白の機能を検討する目的でグリコシラーゼ領域およびAPリアーゼ領域に対する抗ペプチド抗体(抗G抗体、抗L抗体)を作成して、ウェスタンブロットによりその存在を検討し、さらに免疫組織学的手法によりmOGG1蛋白の局在を確認した。その結果、3'-MeDAB投与マウスでは抗G抗体および抗L抗体のいずれによっても38kDaと32kDaのバンドがほぼ同程度の強さで検出された。免疫組織学的検討では3'-MeDAB投与マウス肝臓でコントロールマウス肝臓よりも強い陽性反応が核で認められた。以上の結果より、3'-MeDAB投与によって発現が確認された32kDaのmOGG1蛋白はグリコシラーゼ活性およびAPリアーゼ活性を共に有しており、核に移行して実際に8-OH-Gua修復蛋白として機能している可能性が示された。
- 産業医科大学学会の論文
- 2002-03-01
著者
-
葛西 宏
産業医科大学産業生態科学研究所職業性腫瘍学
-
平野 雄
産業医科大学産業生態科学研究所職業性腫瘍学
-
工藤 秀明
産業医科大学医学部第2解剖学教室
-
土肥 良秋
産業医科大学医学部第2解剖
-
藤本 淳
産業医科大学医学部第2解剖
-
藤本 淳
中村学園大学大学院栄養科学研究科
-
西野 朋子
産業医科大学医学部第2解剖学教室
-
葛西 宏
産業医科大学
-
藤本 淳
産業医科大学医学部第2解剖学
-
藤本 淳
産業医科大学第二解剖学教室
-
土肥 良秋
産業医科大学第2解剖
-
平野 雄
産業医科大学・医学部・職業性腫瘍学
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