〈Original Papers〉外科的処置による低侵襲的卵巣回収および得られた未成熟卵子発生能の検討

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Departmental Bulletin Paper[要約] 本実験では、麻酔下による外科的処置により卵巣摘出を施すことで、動物個体を処分することなく一部の卵巣組織のみを低侵襲的に回収し、そこから得られる未成熟卵子の発生能を検討した。B6D2F1（BDF1）系およびICR系マウスへPMSGを7.5単位投与し48時間後に麻酔処置をおこなった後、供試雌の卵巣を一部切除した（約2mm角）。回収した卵巣の胞状卵胞より、GV 期の未成熟卵子を回収しmTaM培地を用いて体外成熟および体外受精をおこなったところ、いずれの系統においても成熟培養後M II期卵子への発生を認め、体外受精成績はいずれも65％以上であった。またいずれの系統においても胚盤胞期胚までの発生を認めた。さらに、卵巣切除を施した各系統マウスにおいて、卵巣切片による卵胞観察像により卵子が確認され、自然交配により産子作出が可能であった。以上の結果より、外科的処置による卵巣の低侵襲的回収技術により得られた未成熟卵子由来の体外受精は可能であり、今後、低繁殖能を呈する系統や遺伝子改変マウスあるいは野生小型げっ歯類などの希少な動物個体を処分することなく、遺伝資源の効率的な保存・増殖方法の提示が期待されると示唆された。 [Abstract] This study, the developmental potential of immature oocytes collected low invasive by the surgical manipulation under the anesthesia was examined. Mice were used B6D2F1（BDF1）strain and ICR strain of matured mice. Mice are injected PMSG. After 48 hours, a part of ovaries（about 2mm）were extirpated under the anesthesia. Oocytes were collected from a part of ovary collected under the anesthesia Oocytes are transferred maturation medium（mTaM with 5％FBS）and matured in 5％ CO_2 incubator for 16 hours. In vitro matured oocytes were drilled by laser optimal system（XYClone； Nikko-Hansen Co., Ltd.）. In vitro matured oocytes drilled zona pellucida was performed in vitro fertilization and confirmed embryonic development. In vitro fertilization rate that used in vitro matured oocytes was over 65％ in each mice strain. Embryo development was developed to the blastocyst stage in each mice strain. In addition, oocytes were confirmed in the follicle images of the ovary slice after it had passed between convalescences in each mice strain removed the ovary.

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