<Original Papers>ウシ血清アルブミン非添加培地を用いたL-カルニチン添加における体外受精および発生能の検討
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概要
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Departmental Bulletin Paper[要約] 本研究では、ICR系統マウスを用いた体外受精ならびに、初期胚の体外培養について検討した。体外受精では、常法により過剰排卵処置を施した成熟雌マウスより卵を回収し、前培養を行うことにより、受精能を獲得させた精子と共に培養し、受精させた。精子前培養培地および受精培地からウシ血清アルブミンを除き、L-カルニチンを添加した修正HTF培地を用いた。その結果、L-カルニチン添加濃度0mMでは48％（162/337）、1mM では12％（35/294）、2mM では0％（0/311）、5mM では0％（0/292）、10mM では0％（0/270）の受精率が得られた。続いて胚培養を行った結果、L-カルニチン添加濃度0mM では78％（127/162）、1mM では57％（20/35）であり、2mM、5mM、10mM では胚の発生には至らなかった。次に、高分子物質のPVA を0.1％添加した培地でも同様の実験を行い、L-カルニチン添加濃度0mM では25％（96/390）、0.1mM では25％（91/362）、0.5mM では30％（77/256）、1mMでは34％（117/347）の受精率が得られた。続いて胚培養を行った結果、L- カルニチン添加濃度0mMでは80％（76/95）、0.1mM では81％（74/91）、0.5mM では95％（70/74）、1mM では73％（85/117）が胚盤胞期胚へ発生した。これらの結果から、L- カルニチン高濃度における受精阻害を呈することが明らかとなった。また、L-カルニチンに高分子物質であるPVA を添加することで、ウシ血清アルブミンの代替物質になる可能性が示唆された。 [Abstract] The present study examined in vitro fertilization that used the ICR mouse and the in vitro culture of the early embryo. Newly ovulated eggs from mature mouse injected PMSG and hCG were inseminated in vitro with spermatozoa recovered from the cauda epididymidis of mature males. Preculture medium of sperm and fertilization medium added the L-carnitine without bovine serum albmin. Percentage of fertilization were 48％（162/337）at L-carnitine 0mM and 12％（35/294） at L-carnitine 1mM. Following the percentage of blastocyst were 78％（127/162） and 57％（20/35）. Next, the same experiment was performed using the medium that added 0. 1% PVA of polymeric mass. Results of the fertilization rate were 24％（95/390） at L-carnitine 0mM and 25％（91/362） at L-carnitine 0.1mM and 30％（77/256）at L-carnitine 0.5mM and 34％（117/347） at L-carnitine 1mM. Following the rate of developed to blastocysts stage were 73-95％. When the high density L-carnitine from these results, it was shown not to retard of fertilization. Moreover, L-carnitine was indicated the possibility for a substitute of bovine serum albumin by adding PVA.
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