<Original Papers>不凍タンパク質添加によるマウス精巣上体尾部由来冷蔵精子を用いた体外受精操作の検討

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概要

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• Departmental Bulletin Paper[要約] 本研究では成熟B6D2F1マウスの精巣上体尾部由来精子を用いた冷蔵保存を行い、その後、冷蔵精子の評価および体外受精操作について検討した。精巣上体尾部精子を、各種保存液50μL（R18S3、R18、R18+AFP III 1mg/mL）中で4℃にて冷蔵保存した。加温後のそれらの運動性は、精子運動解析装置（IVOS：ニッコー・ハンセン（株））を用いて、保存期間１～ 5日を評価し、R18+AFP III の保存液では、5日目においても52％の運動性を保持していた。精子細胞膜損傷はLIVE/DEAD sperm viability kit を用いて評価し、R18S3 とR18+AFP IIIは5日目の細胞膜完全性の保持率は共に48％であった。受精能の確認では、常法により採卵し冷蔵精子と受精させた。また、一部の卵子卵丘複合体は透明帯穿孔処理を行い、冷蔵精子と受精させた。透明帯穿孔処理後の卵子との体外受精結果は冷蔵保存後3日目の冷蔵精子において37％（46/126）の受精率であった。冷蔵保存後5日目においても2％（4/162）の受精率を確認できた。 以上の結果より、マウス精子の冷蔵保存は低率ではあるが受精能を保持し、冷蔵保存が可能であることが示された。 [Abstract] The present study was performed to examine the storage of Slc : B6D2F1 mouse epididymal sperm at cold temperature. Afterwards, the evaluation and the in vitro fertilization operation of the refrigeration sperm were examined. The cauda epididymal spermatozoa from adult males were preserved with various solutions（ R18S3, R18, R18+AFP III 1mg/mL） at 4℃ . Sperm motility was assessed by Integrated Visual Optical System（ IVOS）. R18+AFP III maintained the movement of 52％ during 5 days. The integrity of the sperm membrane was determined using Live/Dead sperm viability kit. The percentage of membraneintact spermatozoa that stored in R18S3 and R18+AFP III was 48％ at day 5. Super ovulated eggs were fertilized in vitro with various refrigeration sperm. Moreover a part of eggs was treatment of zona drilled, and it was fertilized with the refrigeration sperm. In vitro fertilized rate of zona drilled oocyte withrefrigeration sperm of 3 days after preserved. The fertilization of the refrigeration sperm of the 5 day of preservation was 2％（ 4/162）. In conclusion were indicate that mouse epididymal spermatozoa stored at 4℃ maintain fertilization ability, although low rate, and can store at cold temperature.

著者

• 西村 愛美

  近畿大学大学院生物理工学研究科

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