簡便な成熟ブタ膵内分泌細胞分離法の検討

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膵細胞移植に際しては,大量かつ高純度の膵内分泌細胞を得ることが重要である.本研究では,リンパ球分離溶液を用いた簡便な成熟ブタ膵内分泌細胞の分離法を検討した.屠殺場より入手した成熟ブタ膵を細切・攪拌した後,細胞懸濁液を遠心分離し単離肝細胞を収集した.これをリンパ球分離溶液であモノポリ分離溶液(mono-poly resolving medium: MPRM)を用いて,膵内分泌細胞を外分泌細胞および血管内皮細胞,血液細胞などより分離・精製した.得られた膵分泌細胞数を計測し,形態学的・機能的観察を行った.その結果,(1)得られた膵内分泌細胞数:3.40±1.32×10^5/gのうち,ジチゾン染色陽性細胞数は2.81±1.09×10^5/gで,純度は82.6±2.5%であった.(2)免疫組織化学染色では60%がB細胞であった.(3)電顕では,典型的な分泌顆粒を有するB細胞,A細胞が認められた.(4)グルコース負荷試験では,分離直後のインスリン分泌能低下は1週間の培養で改善し,また40日間の培養中インスリンの分泌が保たれた.成熟ブタ膵内分泌細胞径は,ヒトリンパ球径に類似しており,MPRMを用いた1回の遠心操作で,膵分泌細胞は明瞭に分離され安定した細胞数が得られた.また,膵内分泌細胞の構成は膵島におけるそれと類似しており,超微細構造も保たれていた.以上より,MPRMを用いた膵内分泌細胞の分離法は,簡便で安定した細胞数が得られ,その形態・機能とも良好で有用な方法であると考えられた.
東京女子医科大学の論文
1996-08-25

簡便な成熟ブタ膵内分泌細胞分離法の検討

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