(26)Pricking RT-PCRによるオオムギうどんこ病菌からの遺伝子クローニング(I)
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概要
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本菌は絶対寄生菌であることから,特定の分子ステージにあるうどんこ病菌を大量に得ることは非常に困難であり,その為,それぞれの器官で発現する遺伝子の解析が必ずしも容易ではない.そこで,本実験では,Pricking RT-PCR法を用い,単一の器官を標的として,それらで発現する遺伝子の解析を試みた.まず,あらかじめ作製したEST(うどんこ病菌感染イタリアンライグラスから作製したライブラリー)をクラスター分類し,塩基配列を決定した11,137個のグローンから,構成的に発現するキチン合成酵素遺伝子(chs1,chs2)とβ-tubulin遺伝子(tub2)のホモログを得た.次に,これらを特異的に増幅するPCR-プライマーを分生胞子や付着器に導入し,得られたPCR産物の塩基配列を決定したところ,遺伝子内のイントロン配列がスプライスされたPCR産物が得られた.このような結果から,本法はin situ・RT-PCR法として,うどんこ病菌の単一の分化器官における遺伝子発現解析に適用できるものと結論した.
- 日本植物病理学会の論文
- 2003-02-25
著者
-
松田 克礼
近畿大農
-
野々村 照雄
近畿大農
-
豊田 秀吉
近畿大農
-
鮫島 武
近畿大農
-
角谷 晃司
近畿大薬総研
-
藤田 和久
近畿大農
-
池田 成志
近畿大薬総研
-
木多 景子
近畿大農
-
角谷 晃司
日本草畜種子協
-
豊田 秀吉
近畿大 農
-
野々村 照雄
近畿大 農
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