16S-23SリボソームDNAスペーサー領域の塩基配列を利用したXanthomonas campestris pv. citriのPCR検出

概要

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カンキツかいよう病菌X. c. pv. citriに対して, PCRを利用した迅速で高感度な検出法を開発した。X. c. pv. citri, X. c. pv. glycines, X. c. pv. alfalfae, X. c. pv. physalidicola, X. c. pv. pisi, X. c. pv. pruni, X. c. pv. cucurbitaeおよびX. c. pv. vesicatoriaについて, 16Sおよび23SリボソームRNA遺伝子に存在するスペーサー領域の全塩基配列(約500bp)を決定した。X. c. pv. citriに特異的な配列をもとに, XCF (5'-AGGCCGGTATGCGAAAGTCCCATCA-3')およびXCR(5'-CAAGTTGCCTCGGAGCTATC-3')を設計した。本プライマーを用いることによって地理的分離源の異なった36菌株のX. c. pv. citriと1菌株のX. c. pv. glycinesのすべてで424bpのDNA断片の増幅が認められたが, 他のpathovarでは認められなかった。カンキツ葉面細菌81菌殊について, 本プライマーによるPCRを行ったところ, 病原性を示す9菌株(カンキツかいよう病菌)からのみ424bpのDNA断片の増幅が認められたが, 他の非病原細菌からは認められなかった。PCRの検出限界は30cfu/mlで,これは葉肉接種法の10倍の感度であった。本プライマーを利用したPCRによって,病原細菌が感染したカンキツ葉から約6時間で検出でき,本法がカンキツ組織内における病原細菌の迅速検出に有効であることが示唆された。
1998-08-25