PCR法による土壌細菌の高感度検出(微生物の環境導入とその技術的諸問題)
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概要
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PCRによる土壌細菌の高感度検出について,研究の現状と問題点を紹介した。PCR検出は,(1)土壌DNAの抽出,(2)PCRによる土壌DNAからの目的DNAの増幅および(3)増幅された目的DNAの確認,の3段階からなっている。この内,土壌DNA抽出に際しては,いかに高純度でかつ高収量のDNAが得られるかが重要である。土壌DNA抽出法には,間接抽出法と直接抽出法があるが,いずれの場合にも目的DNAの回収率を高めつつ,腐植酸などのPCR阻害要因を除去することが重要であった。PCR条件を工夫することにより,かなり検出感度を高めることが考えられた、現在までの結果,PCR検出の感度は,間接抽出法でハイブリダイゼーションで1cfu/g(土壌),アガロースゲル上で10cfu/g(土壌)であり,直接抽出法では,殺菌底泥であるがアガロースゲル上で70cfu/gであった。今後さらに高感度な検出法の開発や定量的PCRの開発が望まれた。
- 日本土壌微生物学会の論文
- 1995-10-01
著者
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