A Technique for Detection of Sister Chromatid Exchanges in Flowering Plant, and Spontaneous Sister Chromatid Exchanges in Vicia faba

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概要

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• ソラマメの板端分裂組織細胞における姉妹染色分体交換(sister chromatid exchange;SCE)の検出は,30.71-153.55μg/mlの5-bromodeoxyuridine(BrdUrd)をDNAの前駆体の一つのthymidilic acidの細胞内合成を阻害する5-fluorodeoxyuridine(FdUrd)の共存下で核DNAに取り込ませ(Kihlman and Kronborg,1975),蛍光色素とギムザ染色によるFPG法(fluorescent plus Giemsa technique;PERRY and WOLFF,1974)で行なわれている。しかし,高濃度のBrdUrdはSCEを誘発し(KATO,1974),FdUrdはDNA合成阻害の他にUrd合成阻害,染色体切断,細胞周期所要時間の遅延化などを引き起こすことも知られている(HAUT and TAYLOR,1967;KIHLMAN,1971)。そこで,FdUrdを併用しないBrdUrd(1.0-100.0μg/ml)の核DNAへの取り込ませ,ペクチナーゼ・セルラーゼ処理による細胞壁の消化と引火乾燥法による染色体のスライドグラスヘの塗抹によるFPG法での,姉妹染色分体交換の検出法を開発した。本方法でSCEを検出できたBrdUrdの最小濃度は1.0μg/mlであった。また,1.0-30.0μg/mlのBrdUrdを含む水溶液で,2細胞周期に渡りBrdUrdを取り込ませた後に得られた1細胞当たりのSCEの平均数は10.1-11.6であった。しかし,BrdUrd濃度が50.0および100.0μg/mlでは,その平均数はそれぞれ19.1と26.7と急増していた(Table 2)。すなわち,ソラマメの根端細胞における自然発生的姉妹染色分体交換の頻度は,BrdUrd濃度が30.0μg/mlあるいはそれ以下では,1細胞当たり約10-12であり,DNA 1pg当たり約0.3であった。

• 1989-10-31

著者

• Matsuda Tadao

  Department Of Biology Faculty Of Education Yokohama National University

• Muramatsu Miyuki

  Seibi Gakuen

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