歯肉剥離掻爬手術後の創傷治癒過程における根面表層物質に対する線維芽細胞の走化性について

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歯肉剥離掻爬手術後の歯肉付着再現には, 創傷部間葉系細胞が有系分裂し, 創傷部対応根面に遊走, 根面上に細胞外マトリックスを合成することが必要である. 最近, これらの細胞の一連の事象に影響を及ぼす細胞活性因子が, セメント質や象牙質に含有されていることが示されている. しかしながら, 術後の治癒過程で, セメント質や象牙質に含まれる細胞活性因子が各歯周組織由来細胞の遊性活性に与える影響について検索した研究はみられない. 本研究は, 種々の根面処理を伴った歯肉剥離掻爬手術後の, 各期間における根面表層物質に対する歯周組織由来細胞の走化性を検索した. 加えて, コラーゲンゲルを用いて, 最も高い走化性を示した根面表層物質が細胞移動に与える影響について既知の細胞成長因子と比較検討した. 実験には, ニホンザルの歯肉結合組織, 歯槽骨, 歯根膜およびラット頭蓋冠からそれぞれ単離, 継代培養した3〜5代の培養細胞を使用した. また, 走化性試験に用いる各根面溶出液を得るため, ニホンザル12頭を用いた. その上下顎前歯部歯肉弁を剥離, 同部の歯槽骨を削除した. 根面処理として, セメント質一層掻爬, セメント質一層掻爬後クエン酸塗布, ルートプレーニング, ルートプレーニング後クエン酸塗布を行った. 術後4, 7, 10, 14日に各歯を抜去した. 次いで, 各抜去歯根面を掻爬, その根面表層物質0.2mgをMEM 2ml中に入れ, 超音波洗浄器で振盪した. その上清液を濾過し, 濾液を根面溶出液とした. 手術を施さない上下顎左右側臼歯部の抜去歯根から, 深層セメント質, 脱灰深層セメント質, 象牙質および脱灰象牙質溶出液を得, これらを対照基準の溶出液とした. 走化性試験は48穴microchemotaxis chamberを用いたメンブレンフィルター法にて行った. 次いで, 走化性試験で最も高い走化性を示した根面溶出液, 血小板由来成長因子 (PDGF), transforming growth factor-β (TGF-β), フィブロネクチン (FN) あるいは陰性対照としてMEMを添加したコラーゲンゲル上に, 歯肉結合組織由来細胞を播種, 培養した. 24, 48, 72時間後に前固定し, 型通りの方法で樹脂包埋した. 包埋試料は, まず, 半超薄切片を作製, 細胞のゲル内侵入細胞数ならびに細胞侵入距離を光顕にて測定した. その後, 薄切, 二重染色し, 透過電顕にて観察した. 走化性試験の結果, 深層セメント質および脱灰深層セメント質溶出液に対する歯肉結合組織, 歯槽骨および頭蓋冠由来細胞の走化性は, 術後4, 7日と上昇した. 術後10日では, いったん下降したものの, 14日で再度上昇した. しかし, 象牙質ならびに脱灰象牙質溶出液に対するこれら細胞の走化性はみられなかった. また, これら細胞の走化性は, 深層セメント質溶出液に対して最も高い値を示した. 一方, 歯根膜由来細胞は, すべての溶出液に対して走化性を示さなかった. ゲル内侵入試験の結果, 培養24, 48時間後の侵入細胞数ならびに細胞侵入距離は, 各添加群とも, 陰性対照のMEM群とほとんど差異はなかった. 72時間後になると, 術後7日の深層セメント質溶出液添加群の侵入細胞数および細胞侵入距離は, PDGFおよびTGF-β添加群と同様, MEM群に比べ, かなり促進した. 一方, 超微構造学的には, ゲル内侵入細胞は数多くの細胞突起および発達した細胞質内小器官を有していた. 本実験結果より, 深層セメント質には, 歯肉結合組織および歯槽骨由来細胞の走化性を促進する物質が含まれており, この物質によって促進される細胞走化性は, 術後7日にピークを示すことがわかった. そして, 術後7日の深層セメント質溶出液は, ゲル内の細胞移動に効果的であることが明らかになった.
1992-04-25

著者

松本利一
大阪歯科大学大学院歯学研究科歯科保存学専攻

歯肉剥離掻爬手術後の創傷治癒過程における根面表層物質に対する線維芽細胞の走化性について

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